Практическое занятие №1

Ход работы. 1. Готорят три колбы – две опытные и одну контрольную. В них смешиваю препарат липазы и субстрат (молоко или подсолнечное масло), как указано в таблице:

Компоненты инкубационной смеси	Опытная проба, мл	Опытная проба с желчью, мл	Контрольная проба, мл
Молоко (разведенное 1:10)	10	10	10
Глицериновая вытяжка из пожделудочной железы	1	1	1 (предварительно прокипятить 10 мин)
Раствор желчи	-	1	1
Н2О	1	-	1

2. Приготовленные инкубационные смеси тщательно перемешивают. Затем из каждой колбы отбирают по 2 мл смеси в заранее приготовленные стаканчики для титрования. Добавляют в каждый стаканчик по 1-2 капли раствора фенофталеина и титруют раствором гидроксида натрия до слабо-розового окрашивания. При первом титровании нейтрализуются органические кислоты – молочная и другие, которые присутствовали в молоке до начала действия липазы.
3. Оставшуюся смесь в колбах помещают в термостат, температура которого 38-40⁰С, и через определенные интервалы времени (15, 30, 90 мин) отбирают из каждой колбы (не вынимая их из термостата) по 2 мл смеси и титруют 0,01 моль/л раствором гидроксида натрия. Время титрования и объем израсходованного гидроксида натрия фиксируют в таблице:

Время инкубации, мин	Объем 0,01 моль/л NaOH, пошедшего на титрование, мл
	Опытная проба без желчи	Опытная проба с желчью	контроль
15 30 90

Резултаты первого титрования, полученные до начала действия липазы, вычитают из результатов последующих титрований.
4. На основании полученных данных строят график, где по оси обсцисс откладывают время (в минутах), а по оси ординат – активность липазы, выраженную объемом 0,01 моль/л раствора гидроксида натрия (в миллилитрах), пошедшего на нейтрализацию жирных кислот, образовавшихся за данный отрезок времени. Сравнивают активность липазы в присутствии желчи и без нее.