Практическое занятие №1

Лабораторная работа.
«Выделение лецитинов и кефалинов из желтка курного яйца. Качественные реакции на структурные компоненты».
Лецитины и кефалины (холинфосфатиды и этаноламинфосфатиды) выделяют из сухого яичного желтка путем экстпагирования их спиртом при нагревании. Затем в кислотном гидролизате спиртовой вытяжки с помощью качественных реакций обнаруживают структурные компоненты лицитинов.
Ход работы. 1. Выделение лецитинов и кефалинов (холин- и этаноламифофатидов). 1 г высушенного на воздухе желтка куриного яйца помещают в пробирку с обратным холодильником, наливают 5 мл этилового спирта и пробирку ставят в заранее нагретую до 70-75⁰С водяную баню (огонь под баней должен быть погашен, так как иначе могут загореться пары спирта). Пробирку держат в бане 10 мин, считая от момента закипания спирта, время от времени встряхивая содержимое пробирки. Происходит экстрагирование из желтка лецитинов и кефалинов и части пигментов. Спиртовая вытяжка при этом окрашивается в желтый цвет, а желток значительно обесцвечивается (если значительная часть спирта испарилась, то его следует долить).
После экстрагирования содержимое пробирки отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр. Если фильтрат оказывается мутным, то его фильтруют второй раз через тот же фильтр.
2. Гидролиз лецитинов и качественные реакции на их компоненты. К 1-2 мл спиртового экстракта добавляют равный объем раствора серной кислоты и кипятят 10-15 мин на водяной бане. Происходит гидролиз лецитинов с отщеплением свободного холина и жирных кислот.
а) Гидролизат охлаждают и налюдают появление маслянистых капель на поверхности жидкости – это жирне кислоты.
б) Маленькую каплю гидролизата переносят пипеткой или палочкой на предметное стекло и прибавляют большую каплю насыщенного раствора йода в йодиде калия. Накрыв ее покровным стеклом, наблюдают под микроскопом образование кристаллов холина и виде косо срезанных пластинок и призм бурого цвета (кристаллы Флоранса).
в) Оставшийся экстракт упаривают в фарфоровой чашке на водяной бане. Остаток после упаривания растворяют в нескольких каплях концентрированной уксусной кислоты, добавляют кристаллик FeSO₄, 1 мл раствора пероксида водорода и слабо подогревают (мокрое озоление). Реакция идет бурно. По окончании реакции (прекращение выделения пузырьков газа) экстракт фильтруют и фильтрат используют для качественной реакции на фосфатный остаток. К 1 капле фильтрата прибавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты и большой избыток (5-6 мл) раствора молибдата аммония, содержащего азотную кислоту, и нагревают. При стоянии образуется желтый кристаллический осадок фосфономолибденового аммония.