Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Ход работы: 
К
 
1–2 мл яичного белка приливают равный объем насыщен-ного 
раствора сульфата аммония и перемешивают. Получается полунасыщен-ный 
раствор сульфата аммония, в котором выпадает осадок глобулина. Через 5 минут­ 
осадок отфильтровывают. В фильтрате остается другой белок — яич-ный 
альбумин. Для высаливания альбумина к фильтрату добавляют кристал­ лический 
сульфат аммония до полного насыщения, т. е. пока новая порция соли остается 
нерастворенной. Выпавший осадок альбумина отфильтровывают. 
Работа 7. Осаждение белков 
Белок, находящийся в растворе, способен при определенных условиях вы­ 
падать в осадок. Это его свойство используется для обнаружения белка в ис­ 
следуемом материале и для выделения его в чистом виде. Методы осаждения 
можно разделить на обратимые (высаливание нейтральными солями, действие 
спиртов) и необратимые, которые приводят к разрушению нативной конфор­ 
мации белка, т. е. денатурации. 
Осаждение белков при нагревании 
Выпадение белков в осадок при нагревании характерно почти для всех 
бел­ ков (исключение составляет желатин). Особенно легко и более полно 
происходит осаждение белка в слабокислой среде, вблизи от ИЭТ. В 
нейтральной и сильнокислой среде осаждение белков идет значительно хуже, 
а в щелочной среде вовсе не наблюдается. Тепловая денатурация в начальной 
стадии ведет к региоселективным изменениям конформации, которые могут 
быть обратимыми. На последующей стадии неконтролируемая агрегация 
ведет к об-разованию неупорядоченного клубка. 
Ход работы: 
В пять пронумерованных пробирок наливают по
 
2 мл
 
1 %
 
рас­
 
твора яичного белка. Первую пробирку нагревают до кипения. 
Наблюдают образование осадка. 
Во вторую пробирку добавляют 0,1 мл 1 % раствора уксусной кислоты и на­ 
гревают до кипения. Выпадает хлопьевидный осадок. Осаждение идет полнее 
31 

---

и быстрее, чем в первом случае, вследствие того, что частицы белка теряют заряд, 
потому что pH раствора приближается к изоэлектрическому состоянию. 
В
третью пробирку добавляют 0,5 мл 10 % раствора уксусной кислоты и на­ 
гревают до кипения. Осадок не образуется даже при кипячении, т. к. молекулы 
белка приобретают положительный заряд, что повышает их устойчивость. 
В
четвертую пробирку добавляют 0,5 мл 10 % раствора уксусной кислоты. 
0,5 мл насыщенного раствора хлорида натрия и нагревают. Наблюдают появ­ 
ление осадка. Его образование обусловлено тем, что белок при взаимодей-
ствии с ионами хлорида натрия теряет свой заряд. 
В
пятую пробирку добавляют 0,5 мл 10 % раствора гидроксида натрия. 
При кипячении осадок не образуется, т. к. в щелочной среде увеличивается 
отрицательный заряд белка. 
Осаждение белков концентрированными 
минеральными кислотами 
Многие белки денатурируют при сильном подкислении (pH 2–3). В этих 
условиях практически все диссоциирующие группы белка имеют 
одноименный заряд. Взаимное отталкивание одноименных зарядов вызывает 
разрыв слабых связей, в результате чего нарушается нативная конформация. 
Минеральные кислоты вызывают дегидратацию белковых молекул, а также 
способны к образованию комплексных солей. 
Однако необходимо учитывать, что некоторые белки достаточно 
устойчивы в сильно кислой среде. Например, при pH 2 стабильны гистоны, 
протамины, лизоцим, а у пепсина при pH 1,5–2,2 активность максимальна.