Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Работа 5. Определение изоэлектрической точки казеина 
Определение изоэлектрической точки белков основано на их способности 
под действием осадителей, вызывающих дегидратацию белков, при значении 
pH среды, соответствующих их pI, легко осаждаться. В отличие от других 
белков­, казеин осаждается в изоэлектрической точке без дегидратирующих 
средств. Изоэлектрическая точка казеина соответствует pH 4,7. 
Ход работы: 
В шести пронумерованных пробирках готовят буферные рас­
 
творы с разными значениями pH, используя данные таблицы 4. 
Таблица 4. Соотношение компонентов реакционной смеси (мл) 
для приготовления­ буферных систем для определения ИЭТ казеина 
№ 
Состав буферной смеси 
pH ацетатной Степень помутнения­ 
СН
3
СООН, 0,2 М CH
3
COONa, 0,2 М 
пробирок 
буферной­ смеси раствора казеина 
1 
1,9 
0,1 
3,4 
2 
1,8 
0,2 
3,8 
3 
1,4 
0,6 
4,4 
4 
1,0 
1,0 
4,7 
5 
0,6 
1,4 
5,1 
6 
0,2 
1,8 
5,7 
Содержимое пробирок взбалтывают и в каждую добавляют по 1,0 мл 1 % 
раствора казеина. После этого содержимое пробирок снова встряхивают и 
оставляют на несколько минут, затем по максимальной степени помутнения 
определяют­ изоэлектрическую точку казеина. 
30 

---

Работа 6. Разделение альбуминов и глобулинов яичного 
белка методом высаливания 
Высаливание — обратимая реакция осаждения белков из растворов с 
помощью­ больших концентраций нейтральных солей (NaCl, Na
2
SO
4
, MgSO
4
, 
(NH
4
)
2
SO
4
и др.). При высаливании происходит дегидратация макромолекул 
белка и устранение заряда. На процесс высаливания влияет ряд факторов, та-
ких как гидрофильность белка, его относительная молекулярная масса, заряд. 
Вследствие этого для высаливания различных белков требуется разная 
концен­ трация одних и тех же солей. 
Глобулины осаждаются в полунасыщенном растворе сульфата аммония, а 
альбумины — в насыщенном растворе сульфата аммония.