|
Метод мембранных фильтров.
Сущность метода заключается
в концентрировании бактерий из определенного объема воды на
мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на среде
Эндо при температуре 37 ºС, дифференцированием выросших
колоний и подсчетом количества БГКП в 1 см
3
воды.
Подготовка мембранных фильтров
. Для фильтрования воды
отбирают мембранные фильтры № 3, помещают их в подогретую до
температуры 80 ºС дистиллированную воду и ставят на небольшой
огонь для кипячения. Кипячение проводят трижды по 10 мин. После
первого и второго кипячения воду сливают, а после третьего фильтры
оставляют в воде до употребления.
Подготовка фильтровального аппарата
. Фильтровальный ап-
парат стерилизуют в автоклаве или протирают ватным тампоном,
смоченным в спирте, и обжигают в целях стерилизации. На столик
фильтровального аппарата стерильным пинцетом помещают мем-
бранный фильтр. Во избежание повреждения фильтра под него под-
кладывают кружок стерильной фильтровальной бумаги. На фильтро-
вальный столик с положенными на него фильтрами устанавливают
и закрепляют верхнюю часть прибора – воронку (рис. 12.1).
Фильтрование воды и выращивание микроорганизмов
. В во-
ронку фильтровального аппарата стерильно наливают исследуемый
объем воды и с помощью водоструйного насоса создают вакуум
101
в приемном сосуде. При анализе питьевой воды, поступающей в во-
допроводную сеть, необходимо брать объем не менее 333 см
3
. По
окончании фильтрования мембранный фильтр профламбированным
пинцетом переносят на поверхность питательной среды Эндо в чаш-
ки Петри. В настоящее время выпускают фильтры, пропитанные со-
ответствующими питательными средами. Посевы инкубируют в тер-
мостате при температуре 37 ºС в течение 18–24 ч.
Рис. 12.1. Определение количества микроорганизмов методом
мембранных фильтров
Обработка результатов анализа.
По окончании инкубации
посевы просматривают и делают следующие выводы:
а) отсутствие микробного роста на фильтрах или обнаружение
на них колоний, не характерных для БГКП, позволяет закончить ис-
102
следования на этом этапе анализа с выдачей отрицательного резуль-
тата на присутствие БГКП в анализируемом объеме воды;
б) при обнаружении на фильтре колоний, характерных для
БГКП, исследование продолжают. Из нескольких колоний каждого
типа готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. От-
сутствие в мазках мелких грамотрицательных неспороносных палочек
является основанием для прекращения анализа с выдачей отрицатель-
ного результата на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды;
в) при наличии в мазках грамотрицательных палочек, морфо-
логически сходных с кишечными, ставится оксидазная проба. При
обнаружении на мембранных фильтрах однотипных лактозоположи-
тельных колоний (темно-красных с металлическим блеском или без
него), не вырабатывающих оксидазы, анализ воды на этом этапе за-
канчивают и подсчитывают число выросших на мембранном фильтре
колоний кишечных палочек. Результат выражают в виде коли-
индекса в пересчете на 1 дм
3
воды;
г) при обнаружении на мембранных фильтрах розовых и бесцвет-
ных колоний подсчитывают их число и пересевают 2–3 изолированные
колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. После ин-
кубации в течение 3–4 ч при температуре 37 ºС отмечают изменение
цвета среды за счет образования кислоты и накопления газа в поплавке.
В этом случае результат считается положительным. Если изменений
в среде нет, то дают отрицательный результат на присутствие БГКП.
Пример определения колииндекса: профильтровано три объема
воды по 100 см
3
. На первом и втором фильтрах выросло по три коло-
нии, на третьем – девять колоний. Всего выросло пятнадцать колоний.
Таким образом, колииндекс исследуемого образца воды равен:
(1000×15):300 = 50. Колииндекс переводится в колититр следующим
образом: 1000:50 = 20.
Контрольные вопросы
1. Какие Вы знаете показатели эпидемиологической безопас-
ности питьевой воды?
2. Что такое общее микробное число, колититр и колииндекс?
3. Какие роды микроорганизмов входят в БГКП?
4. Какими методами определяют колиформные бактерии?
5. Каковы основные критерии, по которым устанавливают
присутствие колиформных бактерий в питьевой воде?
6. С какой целью проводят тест на оксидазу?
103
Do'stlaringiz bilan baham: |
