|
Oddiy radial immunoassay
Usul printsipi. Bu usul avvalgisidan ko'ra sezgirroqdir, chunki antiserum quduqdan antigen tarqaladigan agarning bir qismidir. Quduqdan uzoqlashayotganda antigen konsentratsiyasi agarda antikor konsentratsiyasiga ekvivalent bo'lgunga qadar asta-sekin kamayadi. Bu usul birinchi marta 1963 yilda Manchini tomonidan tasvirlangan.
Metodologiya.1,5 g agar 100 ml buferda (0,15 M NaCl) suv hammomida eritiladi, 48 ° C ga qadar sovutiladi va AS bilan aralashtiriladi, yaxshisi bir xil haroratgacha qizdiriladi, kichik nisbatda. 35-40 ° S gacha qizdirilgan stendga qat'iy gorizontal ravishda o'rnatilgan shisha slaydga 2 ml aralashmani pipetka bilan qo'llang. Antikorni o'z ichiga olgan agar eritmasi shisha slaydning yuzasiga yoyilib, qalinligi 1 mm bo'lgan qatlamda qotib qoladi. Shisha slaydda suv oqimi pompasiga ulangan shisha nay yordamida gel qatlamida 8 ta quduq kesiladi (shunday qilib pasaytirilgan bosim hosil qiladi). Har bir quduqqa 2 mkl antigen eritmasi qo'shiladi. Oddiy radial immunodiffuziya reaktsiyasi nam kamerada amalga oshiriladi. Agar yog'ingarchilik chiziqlari etarlicha aniq bo'lsa, natijalarni baholash to'g'ridan-to'g'ri ho'l plastinkada amalga oshirilishi mumkin. Boshqa hollarda, jel plitalari 0,15 M NaCl da 2-3 marta yuviladi; har bir yuvish 12 soat davom etadi. Bu cho'ktirilmagan oqsillarni olib tashlashga erishadi. Yuvishdan keyin preparatlar quritiladi va bo'yaladi, masalan, Amido Black 10B. Bunday holda, aniq belgilangan yog'ingarchilik halqasi hosil bo'ladi. Kiritilgan antigenning kontsentratsiyasi qanchalik yuqori bo'lsa, halqaning diametri shunchalik katta bo'ladi. Agar reaksiyada antigen konsentratsiyasi ma'lum bo'lgan bir nechta standartlar qo'llanilsa, u holda kalibrlash egri chizig'ini solishtirish yoki qurish orqali namunalardagi antigen miqdorini aniqlash mumkin. Antikor titrini aniqlash uchun jel antigen bilan belgilangan nisbatda aralashtiriladi, antikorlar jelga tarqaladi (teskari radial immunodiffuziya). Yog'ingarchilik halqalarining radiusi titrga proportsionaldir. Yuvishdan keyin preparatlar quritiladi va bo'yaladi, masalan, Amido Black 10B. Bunday holda, aniq belgilangan yog'ingarchilik halqasi hosil bo'ladi. Kiritilgan antigenning kontsentratsiyasi qanchalik yuqori bo'lsa, halqaning diametri shunchalik katta bo'ladi. Agar reaksiyada antigen konsentratsiyasi ma'lum bo'lgan bir nechta standartlar qo'llanilsa, u holda kalibrlash egri chizig'ini solishtirish yoki qurish orqali namunalardagi antigen miqdorini aniqlash mumkin. Antikor titrini aniqlash uchun jel antigen bilan belgilangan nisbatda aralashtiriladi, antikorlar jelga tarqaladi (teskari radial immunodiffuziya). Yog'ingarchilik halqalarining radiusi titrga proportsionaldir. Yuvishdan keyin preparatlar quritiladi va bo'yaladi, masalan, Amido Black 10B. Bunday holda, aniq belgilangan yog'ingarchilik halqasi hosil bo'ladi. Kiritilgan antigenning kontsentratsiyasi qanchalik yuqori bo'lsa, halqaning diametri shunchalik katta bo'ladi. Agar reaksiyada antigen konsentratsiyasi ma'lum bo'lgan bir nechta standartlar qo'llanilsa, u holda kalibrlash egri chizig'ini solishtirish yoki qurish orqali namunalardagi antigen miqdorini aniqlash mumkin. Antikor titrini aniqlash uchun jel antigen bilan belgilangan nisbatda aralashtiriladi, antikorlar jelga tarqaladi (teskari radial immunodiffuziya). Yog'ingarchilik halqalarining radiusi titrga proportsionaldir. Agar reaksiyada antigen konsentratsiyasi ma'lum bo'lgan bir nechta standartlar qo'llanilsa, u holda kalibrlash egri chizig'ini solishtirish yoki qurish orqali namunalardagi antigen miqdorini aniqlash mumkin. Antikor titrini aniqlash uchun jel antigen bilan belgilangan nisbatda aralashtiriladi, antikorlar jelga tarqaladi (teskari radial immunodiffuziya). Yog'ingarchilik halqalarining radiusi titrga proportsionaldir. Agar reaksiyada antigen konsentratsiyasi ma'lum bo'lgan bir nechta standartlar qo'llanilsa, u holda kalibrlash egri chizig'ini solishtirish yoki qurish orqali namunalardagi antigen miqdorini aniqlash mumkin. Antikor titrini aniqlash uchun jel antigen bilan belgilangan nisbatda aralashtiriladi, antikorlar jelga tarqaladi (teskari radial immunodiffuziya). Yog'ingarchilik halqalarining radiusi titrga proportsionaldir.
Do'stlaringiz bilan baham: |
