Prolaktin. YAngi muzlatilgan gipofizning oldingi bo‘lagidan tayyorlangan qiyma, 1:2 nisbatda suv bilan aralashtirilib, so‘ng unga 1:8 nisbatda atseton va oksidlangan xlorid kislotasi qo‘shiladi. Aralashma 1,5 soat aralashtiriladi va suzilib, siqib olinadi. Ajratmada atsetonni konsentratsiyasini 90% gacha ko‘tarish bilan biologik faol moddalar cho‘kmaga tushiriladi va 00S dan yuqori bo‘lmagan haroratda tindirish uchun bir kechaga qoldiriladi. CHo‘kma nutch filtri orqali filtrlanib, atseton bilan yuviladi va quritiladi.
Quruq nordon massa 0,6% sirka kislotasining eritmasida eritilib (50 g massaga 1 l erituvchi), 10% natriy ishqori yordamida pH muhiti 2,8-3,0 ga keltiriladi. Eritma loyqa bo‘lib, undagi laktinni tezroq cho‘kmaga tushirish uchun, natriy xloridning to‘yingan eritmasidan foydalaniladi (1 l aralashmaga 60 ml natriy xloridning to‘yingan eritmasi) va tindirish uchun 3 soatga qoldiriladi. CHo‘kma sentrafugalash orqali ajratib olinib, quritiladi. Quruq massa standartlanib, undan in’eksion eritma tayyorlanadi va bakterial filtr orqali filtrlanib, 1 ml dan ampulalarga quyiladi. Preparat sut bezlaridan sutni ajralib chiqishini tezlashtirish uchun yangi farzandli bo‘lgan ayollarga tavsiya etiladi.
Xorionik gonadotropin (Gonadotropinum chorionicum) – xomilador ayollarning siydigidan olinadi, tarkibida gonadotrop gormonlarini saqlaydi. Xomiladorlikning birinchi yarimidan o‘tgan ayollarning toza va yangi siydigi sirka kislotasi bilan kuchsiz kislotali sharoitgacha oksidlanadi. Eritma filtrlanadi va vakuum bug‘latgichda 35-400S haroratdan yuqori bo‘lmagan haroratda bug‘latiladi, toki boshlang‘ich ajratmaga nisbatan 1/10 qism ajratma qolguncha. Qolgan qoldiq sovutilib, 4 marta ko‘p miqdorda 95% etil spirti bilan aralashtiriladi. Natijada cho‘kma hosil bo‘ladi. CHo‘kma filtrlanib, spirt va efir bilan yuviladi, so‘ng tozalanadi. Buning uchun qoldiq 10 marta ko‘p miqdordagi suvda eritilib, sentrafugalanadi. Eritmaga ammoniy xlorid va magniy xloriddan tashkil topgan reaktiv qo‘shiladi. Keyin esa, ammiak eritmasidan siydik tarkibidagi fosfatlarni cho‘ktirish uchun, ishqoriy muhitgacha ammiak eritmasi solinadi. Eritma filtrlanib, unga nisbatan 4 marta ko‘p miqdorda spirt qo‘shiladi. Hosil bo‘lgan cho‘kma filtrlanib yig‘ib olinadi, spirt va efir bilan yuvilib, eksikatorda sulfat kislotasi yoki kalsiy xlorid ishtirokida quritiladi.
Aralashma -2-50S haroratda, 10-12 soat davomida qoldiriladi, natijada nordon atsetonli cho‘kma hosil bo‘ladi. Cho‘kma nutch filtri orqali filtrlanib, 98% sovutilgan atseton bilan cho‘kma yuviladi va xavo oqimida quritiladi. Nordon atsetonli kukun suvda eritilib, oksidlangan sirka kislotasi va ammiak eritmasidan pH ko‘rsatkichi 5,0 bo‘lgunga qadar qo‘shiladi. Izoelektrik nuqtada laktogen cho‘kmaga tushadi, cho‘kma setrafugalash orqali ajratib olinadi va undan laktin preparatini olishda foydalaniladi. Laktogen gormoni ajratib olingandan so‘ng qolgan qoldiqqa ammoniy-atsetat buferidan pH ko‘rsatkichi yana 5,0 ga etguncha qo‘shiladi va KM-sefadeks kationiti bilan to‘ldirilgan K-25 markali kolonkadan o‘tkaziladi. Natijada kortikotropin ion almashinuvchi smolaga adsorbsiyalanib, undan kortikotropin ammoniy atsetat buferining etanoldagi eritmasi bilan desorbsiyalanadi. Elyuatdan AKTG etanol bilan cho‘kmaga tushiriladi. Cho‘kma setrafugalash orqali ajratib olinadi va etanol va atseton bilan yuvilib, xavo oqimida quritiladi. AKTG suspenziyasining faolligi 70-90 TB/mg. AKTG biologik usulda standartlanadi.
Do'stlaringiz bilan baham: |