O’zbekiston Milliy Universiteti Biologiya fakukteti 201-guruh talabasi

2.1. Mitoxondriyalarni ajratib olish

Mitoxondriyalarni Shneyder usuli bo`yicha differensial sentrifugalash orqali

150-200 grammli kalamushlar jigaridan ajratib oldik [Schneider, Hogeboom, 1951;

Виноградов и др., 1977]. Kalamush avval harakatsizlantirilib, keyin jigari tanadan

ajratib olindi  va muzli ajratish muhitiga solindi. Ajratish muhiti tarkibi quyidagicha:

saxaroza 250 mM, tris-НСI 10 mM, EDTA 1 mM, рН 7,4. Jigarning massasi aniqlab

olingandan so`ng, mexanik press orqali ezildi va 6 hissa ko`p ajratish muhitiga solib

teflonli  gomogenezator  yordamida  maydalandi.  Birinchi  sentrifugalash  SLR-1

sentrifuganing  rotoriga  0(1o  S  haroratda  7  daqiqa  davomida  daqiqasiga  1500

aylanish  tezligida  amalga  oshirildi,  so`ngra  cho`kmaga  tushgan  yadro  va

hujayraning boshqa fragmentlari ajratib olindi. Supernatantni 2-marta daqiqasiga

6000 aylanish tezligida 15 daqiqa davomida sentrifuga rotoriga qo`yildi. Cho`kmani

10:1  nisbatdagi  ajratish  muhitida  suspenziyalandi.  Ajratib  olingan  mitoxondriya

tajriba uchun 40 daqiqa davomida muzli banyada tinim holatiga qo`yildi.