Namangan davlat universiteti tabiiy fanlar fakulteti biologiya kafedrasi


Эритротситларни ювиш ва ишчи суспензияни тайёрлаш



Download 8,06 Mb.
bet95/114
Sana21.04.2022
Hajmi8,06 Mb.
#569358
1   ...   91   92   93   94   95   96   97   98   ...   114
Bog'liq
BIOFIZIKA majmua (1)

Эритротситларни ювиш ва ишчи суспензияни тайёрлаш.

Қон плазма шаклли элементлардан, асосийси эритроцитлардан ташкил топган бўлади. Олинган қонни 1:10 нисбатда Рингер билан суюлтирилиб албатта коагулянт солган ҳолда, 3000 айланада 10 минут давомида центрифуга қилинади. Чўкма усти суюқлиги секин пипетка ёрадмида олинади (коагулянтсиз) Рингер эритмаси билан яна 2 марта такрорланади. 3 марта Рингер билан ювилган ҳужайралар 20-40 % га етиб қолади. Суспензиядаги гематокрит(суспензиянинг ҳажмий қисмини ташкил этиб, эритроцитлар билан % қисмларда шуғулланади) эритроцитларни аниқлаш учун яна 3000 айланада 3 минут давомида центрифугаланади. Бунинг учун одатий гематокрит капиллярлар, ёки 0.1 мл ўлчамли шиша пипетка кончикдан 10 м узоқликда кесилганини ишлатиш мумкин. Капиллярлар охири бирор бир пластилин билан беркитилган бўлиши керак. Ориқ пипеткалар билан ишлаганда қўл перчаткасидан олинган бармоқчалардан фойдаланиш тавсия этилади. Центрифугаланган суспензия аниқ икки қисмга ажралиб қолади: сувли ва қон (қизил). Гематокрит (Г) ҳужайра ҳажми фазаси билан (В) умумий ҳажм В(умумий) нинг фозиларда ифодаланган кўпайтмалари билан ифодаланади.

Г = Вкл / Вобщ х 100% (1)


Суспензиядаги эритротситларнинг охирги концентрацияси 2-4% га келиб қолади. Эксперимент мақсадига қараб, 2-4% ҳужайра суспензиясини олиш учун шундай концентрацияли суспензияли тайёрланади. Масалан, агар тажриба давомида суспензия икки маротаба суюлтирилса, ички гематокрит 4-8% ни ташкил этади. Лекин агар у 10 марта суюлтирилса ички гематокрит 40-80% ни ташкил этади. Ҳужайра суспензиясининг охирги концентрациясига олиб келиш учун (4-40%) Рингер эритмаси керак бўлади.

  1. Аниқлаш йўли.

Микротитраторнинг ўйиқли платасида аниқлаш.
Микротитраторнинг 11 та ўйиқли платасига 200 мкл Рингер эритмаси солинади. Биринчи ўйиқ онтрол учун қолади. 2-ўйиққа аниқланаётган моддадан максимал концентрацияда солинади ва яхшилаб титрланади (10 мартадан кам бўлмаган ҳолатда). Кейин 2-ўйиқдан 200 мкл эритмадан олиб, 3-ўйиққа соламиз ва 5 марта титрлаймиз. Бу ишни қолган барча ўйиқларда такрорлаймиз. Бунинг натижаси ўлароқ, ҳамма ўйиқлардаги аниқланаётган ўйиқлардаги эритма концентрацияси қўшни эритма концентрациясидан 2 мартага фарқ қилади. Яна бу ўйиққа 1 % ли Тритон Х-100 эримасидан ҳужайрани тўлиқ гемолизлаш учун солинади. Тажриба уч марта ўтказилиши керак. Шунинг учун ҳамма проседурани яна 2 қаторда такрорлаш лозим. Ҳамма ўйиқларга 200 мкл 8%ли эритроцитлар суспензиясини солиш керак ва столнинг устки юзасида айлантириб аралаштириш лозим. Платани ойна билан ёпиб 37С0 да 30-60 минут давомида буғлатиш учун инкубация қилинади ва ҳар 10 минутда аралашитирилиб турилади. Ўйиқлардаги суюқликларни тоза 1.5 мл ли пробиркаларга олинади ва ҳар бирига 1 мл дан Рингер солиниб, 3000 айланада 10 минут центрифуга қилинади. Чўкма усти суюқлигини оптик зичлигини 540 нм да ўлчанади (максимал гемоглобин адсорбсияси). Гемолиз фоизи қуйидаги формуладан клетириб чиқарилади: (2)
Гемолиз = (ОП / ОП100) х 100% (2)
ОП- бу тажрибадаги чўкма усти суюқлигининг оптик зичлиги; ОП100- 3-ўйиқдаги тритон Х-100 детергенти билан чўкма усти суюқлигини ўртача оптик зичлиги. 3-контролний ўйиқдан ҳисобланган гемолиз берилган тажриба шароитлари билан спонтан гемолиз даражасини беради. Тажриба яхши олиб борилиши учун у бир неча фоизларга оширилмайди. Агар спонтан гемолиз даржаси юқори бўлса (5% га яқин), кир идишлардан фойдаланилган бўлади, ҳамда тажриба қайтадан қилиниши лозим, алоҳида эътиборни ишни тўғри кетишига қаратиш лозим

Download 8,06 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   ...   91   92   93   94   95   96   97   98   ...   114




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©hozir.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling

kiriting | ro'yxatdan o'tish
    Bosh sahifa
юртда тантана
Боғда битган
Бугун юртда
Эшитганлар жилманглар
Эшитмадим деманглар
битган бодомлар
Yangiariq tumani
qitish marakazi
Raqamli texnologiyalar
ilishida muhokamadan
tasdiqqa tavsiya
tavsiya etilgan
iqtisodiyot kafedrasi
steiermarkischen landesregierung
asarlaringizni yuboring
o'zingizning asarlaringizni
Iltimos faqat
faqat o'zingizning
steierm rkischen
landesregierung fachabteilung
rkischen landesregierung
hamshira loyihasi
loyihasi mavsum
faolyatining oqibatlari
asosiy adabiyotlar
fakulteti ahborot
ahborot havfsizligi
havfsizligi kafedrasi
fanidan bo’yicha
fakulteti iqtisodiyot
boshqaruv fakulteti
chiqarishda boshqaruv
ishlab chiqarishda
iqtisodiyot fakultet
multiservis tarmoqlari
fanidan asosiy
Uzbek fanidan
mavzulari potok
asosidagi multiservis
'aliyyil a'ziym
billahil 'aliyyil
illaa billahil
quvvata illaa
falah' deganida
Kompyuter savodxonligi
bo’yicha mustaqil
'alal falah'
Hayya 'alal
'alas soloh
Hayya 'alas
mavsum boyicha


yuklab olish