|
П-этап
– собственное микроразмножение, т.е. максимальное образование дополнительных почек
и побегов.
Ш-этап
– укоренения размноженных побегов. На этом этапе необходимо обеспечить развитие
нормальной корневой системы, после чего растения либо подготавливают к высадке в почву, либо
помещают на хранение при пониженных температурах. Последний прием имеет важное значение, т.к.
позволяет задержать развитие и сохранять их длительное время, используя по мере необходимости.
На первом этапе микроразмножения испытывали среды Мурасиге-Скуга, Лепуавра и Плант-
Медиум, отличающиеся содержанием минеральных солей и дабавками (органика) (табл. 1).
На этапе введения эксплантатов в культуру (то есть в нулевом пассаже) концентрация 6-БАП
составила 1 мг/л. среды.
Из таблицы видно, что наибольший процент прижившихся меристем оказался на питательной
среде Мурасиге-Скуга и Лепуавра 60-70%.
321
Таблица 1. Развитие меристем подвоев яблони на различных питательных средах
Наименование сред
Подвои
Мурасиге-Скуга
Лепуавра
Plant-
Medium
ММ-106 70
60
50
М-26
70
65
50
АРМ-18 65
65
50
Б7-35 65
60
45
Б 53-497
70
65
55
Существенной разницы в развитии изолятов на этих средах не наблюдалось.
Необходимо отметить зависимость развития изолятов от условий их содержания . Культивировали
изоляты при освещенности около 5 тыс.лк. и 16-ти часовом дне при температуре +22-25°С.
Меристематические верхушки, взятые в качестве источников эксплантатов, при культивировании на
искусственных питательных средах через две недели после введения в культуру начинали развиваться.
Через 4-5 недель изоляты переносили на свежие питательные среды. В течения первого пассажа
коэффициент размножения составил 1-2 от одной инициали.
Для снятия апикального доминирования и инициации побегообразования у изолятов, в среду
вводили 6 – БАП в концентрациях 1; 2; 3 мг/л. С повышением концентрации 6 – бАП, коэффициент
размножения увеличивается. У подвоев М-26 и ММ-106 при концентрации 2 мг/л, количество
дополнительных почек и побегов составило 9 и 7 шт. соответственно, а при концентрации 3 мг/л. – 13-10
шт. При концентрации 6-БАП – 1 мг/л. у всех подвоев коэффициент размножения составил 2-4.
Коэффициент размножения у подвоев Б7-35, АРМ-18, Б53-497 на среде с концентрацией 6 БАП – 2мг/л
составил 6-5-6 шт.
Оптимальной для всех подвоев оказалась концентрация 6-БАП в среде – 2 мг/л. (фото 1).
Фото 1. Размножение подвое яблони М-26 на питательной среде М-С
При разделении побегов и их культивирований большое влияние на способность к размножению
оказывает их ориентация. При вертикальном расположении побегов массовое образование
дополнительных структур происходит лишь у пазушных почек, расположенных там, где побег имеет
контакт с питательной средой. Такие эксплантаты редко дают около 10 дополнительных почек и побегов.
При горизонтальном расположении декапитированного побега и при удалении у него листьев практически
каждая пазушная почка дает пучок побегов, так как при такой ориентации 6-БАП, находящийся в среде,
одинаково воздействует на все почки (фото 2).
Фото 2. Формирование дополнительных структур в зависимости от расположения побега на питательной
среде
При получении определенного количества побегов, конгломерат в колбе разделяли, часть побегов
(20-30 мм.) пригодных для укоренения высаживали на среду для укоренения, побеги малых размеров,
менее 15 мм. и дополнительные почки высаживали на свежие среды для дальнейшего размножения.
322
Укоренение – важный момент размножения растений «ин витро». Побеги укореняли при
достижении их 20-30 мм. с 5-6 листиками на среде Кворина-Лепуавра. Макро и микросоли снижали в два
раза, органическая часть не изменялись.
Для инициации корнеобразования использовали регулятор роста ауксиновой природы –
индолилмасляную кислоту (далее ИМК).
Испытывали 2 способа укоренения микропобегов :
1. Непосредственное включение ИМК в питательную среду.
2. Предварительное замачивание микропобегов в растворе ИМК (50 мг/л.) с последующим
помещением их на среду, не содержащую стимуляторов роста.
Оптимальная концентрация для всех подвоев составила 2,0 мг/л., процент укоренения составил 40-
60%.
Процент укоренения при замачиваний составили 50-55 у подвоев ММ-106, М-26. У подвоев АРМ-
18, Б53-497 процент укорененных побегов составил 40, 35, 40 соответственно (фото 3).
Фото 3. Влияние ИМК на процесс ризогенеза клоновой подвоя яблони Б53-497
Этот метод укоренения имеет преимущества перед введением препарата непостредственно в
среду – корнеобразование существенно ускоряется, корни обычно появляются на 8-10 день без
образования значительного раневого каллюса.
Наиболее сложным вопросом клонального микроразмножения подвоев яблони является адаптация
пробирочных растений к нестерильным условиям. На данном этапе размножения наблюдается большой
процент гибели растений.
Создание соответствующего микроклимата на основе физиологических требований растений к
условиям среды во многом определяет успех адаптации пробирочных растений к нестерильным условиям
культивирования.
Наиболее важными факторами микроклимата, требующими постоянного контроля – температура
и водно-физические свойства субстрата.
В качестве субстрата использовали легкие, достаточно влагоемкие и хорошо аэрируемые
материалы. Испытывались смесь торфа с песком, торф с перлитом = 3 : 1 (по объему), торф : песок : почва
= 1 : 1 : 2, почва : навоз : песок = 2 : 1 : 1.
Наиболее приемлемыми составами субстрата оказались торф : песок = 3 : 1 и торф : песок : почва
= 2 : 1 : 1.
Через 8-10 дней растения трогались в рост, на верхушке побега появлялись новые листья,
происходил рост стебля (фото 4).
Фото 4. Развитие растений подвоя М-26 (инвиво) в период адаптации
323
Субстрат поддерживали во влажном состоянии.
Уход состоит в регулярном поливе и подкормках.
После того как растения тронулись в рост, проводили подкормку слабым раствором минеральной
основы среды Мурасиге-Скуга.
При определенных условиях их содержания растения начинают быстро расти.
Через 1-2 месяца растения практически готовы к пересадке в открытый грунт.
За полученными растениями «ин виво» ведется соответствующий агроуход.
Do'stlaringiz bilan baham: |
