Маъруза мавзуси 8-мавзу: молекуляр клонлаш. Лигирлаш реакцияси. Компонент хужайраларни тайёрлаш ва трансформация қилиш

БАКТЕРИАЛ КОЛОНИЯЛАРИДА ПЗР-СКРИНИНГИ ЎТКАЗИШ

Ўсиб чиққан оқ колонияларда биз учун қизиқарли бўлган геном - плазмида қўшимчаси борлиги текшириш керак. Бунинг учун колонияларда ПЗР-текшируви ўтказилади. 8.4-жадвалда ПЗР-скрининги учун ишлатиладиган реагентлар келтирилган. Реакцияни ўрнатиш тартиби ПЗР амплификацияси билан бир хил, намунадаги ДНК ўрнига фақат бактериал колония қўшилади (Sambrook et al., 2001).

Вазифа 3. Колонияларни ПЗР-скрининги ва агароза гели электрофорези ёрдамида ПЗР-амплификацияси маҳсулотларини таҳлил қилиш

1. Колониянинг бир қисмини стерил тиш тозалагич ёки микропипетка учлиги ёрдамида ПЗР реакция аралашмаси бўлган пробиркага ўтказинг.

2. Кейин, учликни (ёки тиш тозалагич) реакция аралашмаси бўлган пробиркага туширинг ва колонияларни ампициллин ва тетрациклин билан бирга янги идишга экинг.
3. Идишни 14-16 соат давомида 37° C ҳароратда инкубаторга қўйингг.
4. ПЗР-амплификацияси режими, 4-жадвалга қаранг.
Жадвал 8.4
ПЗР-скрининги учун реакция аралашмасини таркиби

Рекция компонентлари	Хажм, мкл
10Х Taq-буфери	2
2,5 мМ MgCl2	1
0,2 мкМ 2'-дезоксинуклеозид-5'-трифосфатлари	0,2
20 мкМ тўғри праймер*	0,2
20 мкМ тескари праймер*	0,2
Taq-полимераза 5 ед/мкл	0,05
Бидистилланган H20	6,35
Якуний реакция ҳажми	10

^* праймерларнинг номи ва кетма-кетлиги 8.5-жадвалда келтирилган.

8.5-жадвал