Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Микроскопическое исследование грибов
Для диагностики микозов могут быть использованы:
микроскопические, микологические (культуральные), аллергические,
серологические, биологические и гистологические методы исследования. В зависимости от патогенеза материалом для исследования могут быть гной, мокрота, пораженные волосы, ногти, чешуйки кожи, пунктаты костного мозга, лимфатических узлов, внутренних органов, кровь, желчь, испражнения, биоптатытканей и т. п. Микроскопическое исследование включает микроскопию нативных (неокрашенных) и окрашенных мазков. Для приготовлениянативных препаратов волосы, соскобы кожи, ногтей просветляют в 10—30 % растворах КОН или NaOH. Обработанный щелочью материал помещают на предметное стекло в каплю глицерина, накрывают покровным стеклом и микроскопируют(можно использовать фазово-контрастную микроскопию), что дает возможность изучить строение гриба, расположение спор, но окончательное заключение о видовой принадлежности гриба можно сделать только после культуральных исследований. Для окраски мазков чаще всего используют методы Грама, Циля—Нильсена, Романовского—Гимзы. Для окраски дерматофитов применяют также методы Сабуро, Адамсона и др. Микроскопию проводят сначала под малым увеличением, а затем большим без иммерсии. Выявляют типичные для грибов элементы: нити мицелия, споры или клетки дрожжей, гифы.Культуральное (микологическое) исследование проводят для выделения чистой культуры гриба и ее идентификации. Используют плотные и жидкие питательные среды (Сабуро, Сусло-агар, Чапека и др.). Инкубация в термостате 25—28 °С, длительность2—4 нед. Чистую культуру гриба идентифицируют по совокупности признаков: форме колоний, их цвету, консистенции, микроскопической картине (характер мицелия, расположение спор, конидиеносцев) и другим признакам.
Серологические реакции для диагностики грибковых заболеваний проводят с грибковыми антигенами по общепринятымметодикам, как и для диагностики других инфекционных заболеваний (РА, РП, РСК, РИГА, РИФ и др.). Аллергические пробы можно проводить по общепринятым методикам внутрикожным введением соответствующих аллергенов(полисахаридные и белковые фракции из клеток или клеточных оболочек, взвесь клеток убитых грибов, фильтраты культур). Для выявления ГНТ можно использовать тест дегрануляциитканевых и сывороточных базофилов, а для выявления ГЗТ — реакции торможения миграции фагоцитов, бластной трансформации лимфоцитов.
Биологическое исследование проводят на лабораторных моделях (мыши, крысы, морские свинки, кролики, собаки, кошки). Биологическую модель микоза используют для выявления патогенности возбудителя, выделения чистой культуры, изучения новыхантимикотиков. Гистологическое исследование дает возможность обнаружить гриб в тканях, изучить его морфологию и особенности патологического процесса, вызванного им в организме.
АНАЛИЗ МИКОЗОВ
Основан на выявление возбудителя.
Рост различных грибов (2-4 дней, 4 недели), диморфные грибы выращивают длительно, напримерBulgaarза8 недель. В Микологических лабораториях основные используемые питательные среды - средаСабуро, агар с декстрозой (плотный, полужидкий), Сабуро (жидкая среда). Для выращивания патогенных грибов оптимально 30 °C,20-25 °C.
Для инкубации многих грибовуходит более 4-х недель.
Диагностическое значение культур:
•определить все виды плесневых грибов если были микроскопически обнаружены;
• степени стерильности материала (дрожжи или плесневые грибы)
• диморфные грибы;
• формирование Cryptococcus из грибов;
• выделение из кожи, волос диморфных грибов