Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Бактериологический метод.
Патологический материал сеют на Сабуро, Сусло агар, МПА с 2% глюкозой, в настоящее время предлагаются готовые среды компанией HiMediaxromogen. Посевы держатся в термостате при 22-37º C в течение 24-48 часов.
Сабуро и штаммы C. Albicans в открытом воздухе образует кремового цвета, блестящие образовании как капля майонеза колоний.
Xromagen (г / л):
Пептид (специальный) -15,0
4.0 дрожжи экстракт-
Калий гидрофосфат- 1.0
Xromagen соединение - 7,22
Хлорамфеникол - 0,50
Агар-агар - 15,0
После подготовки рН (25º С) 6,3 ± 0,2.
Готовый 42,72 г порошка растворяется в 1000 мл дистиллированной воды, полное смешивание во время кипения (не автоклав) 50 º C. После охлаждение отливают в чашку Петри.

Рисунок 77.
Более подробная идентификация выделенных грибов с определением их вида проводится по следующей схеме:
определение типа филаментации;выявление хламидоспор;
изучение биохимических свойств - ферментация углеводов.
Для определения типа филаментации готовят блоки из картофельного или рисового агара по Н. П. Блинову. В упрощенном варианте эту работу можно выполнить так: расплавленный картофельный агар охлаждают до температуры около 60° C. Стерильной пипеткой наносят на стерильное предметное стекло около 0,5 мл такой среды, вносят в нее петлей исследуемую культуру, смешивают и покрывают стерильным покровным стеклом. Предметное стекло помещают в стерильную чашку Петри, на дне которой имеется стерильная фильтровальная бумага, пропитанная стерильной дистиллированной водой. Лучше между предметным стеклом и фильтровальной бумагой положить стерильные деревянные палочки, которые можно приготовить из спичек, удалив серу. Закрытую чашку с предметным стеклом инкубируют в термостате при 37° C в течение 48 ч, а затем микроскопируют. Если выявить филаментацию не удается, то чашку с предметным стеклом оставляют при комнатной температуре и микроскопируют препарат на 3-5-7-е сутки с момента приготовления препарата. Препараты микроскопируют сначала при малом, а затем при большом увеличении. На них выявляются тип филаментации и хламидоспоры одновременно. На одном предметном стекле можно приготовить два блока. В ходе исследования необходимо дополнительно увлажнять чашку дистиллированной водой. Аналогичным способом, но быстрее (через 18-20 ч) определяется тип филаментации и обнаруживаются хламидоспоры при посеве культуры из колоний на питательную среду хламидоспор-агар.
Можно определить тип филаментации и наличие хламидоспор без блоков - делать посев прямо на чашки с картофельным или рисовым агаром - радиально или по кругам (одновременно несколько культур), но при такой методике нужны высокая степень прозрачности среды и чашки из тонкого стекла.
Хламидоспоры выявляют обычно одновременно с изучением типов филаментации. Это крупные круглые образования, покрытые резко контурированной оболочкой, расположенные обычно на концах нитей псевдомицелия. Хламидоспоры лучше обнаруживаются на хламидоспор-агаре, на рисовом или картофельном агаре, особенно под покровным стеклом, где создаются менее благоприятные условия для развития грибов.