Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Расщепление углеводов.
Для определения способности микроорганизмов ферментировать углеводы используют короткий и длинный «пестрый» ряд. Первый включает в себя среды Гисса с моно- и дисахаридами: глюкозой, лактозой, сахарозой, мальтозой и с шестиатомным спиртом – маннитом. В длинный «пестрый» ряд вводят дополнительно среды с моносахаридами (арабинозой, ксилозой, рамнозой, галактозой и др.), полисахаридами (инулином, крахмалом, гликогеном и др.) и спиртами (глицерином, дульцитом, инозитом и др.). В качестве индикатора во все среды добавляют реактив Андреде или др. индикатор.
Чистую культуру исследуемых бактерий засевают петлей на среды «пестрого» ряда. Посевы инкубируют при 37⁰С в течение 18-24 ч. Если бактерии разлагают углевод, тогда как промежуточное вещество образуется альдегид, кислота и газобразные продукты (СО₂, Н₂, СН₂). Факультативные и строгие анаэробы разлагают углеводы, в результате чего образуются различные продукты брожения (масляная кислота, молочная кислота, муравьиная кислота и спирты). Промежуточные продукты, образующиеся в результате расщепления углеводов бактериями, изменяют рН среды, что в свою очередь изменяет цвет среды с индикатором, если углевод расщепляется до кислоты и газобразных продуктов, наряду с изменением цвета появляются пузырьки газа (в жидких средах). Если используется плотная среда агара, образование газа можно определить разрывом столбика агара (рис.).
При отсутствии ферментации цвет среды не меняется. Поскольку бактерии ферментируют не все, а только некоторые углеводы, входящие в состав сред Гисса, Клигера, и наблюдается довольно пестрая картина. Поэтому набор сред с углеводами и цветным индикатором был назван «пестрым» рядом.
Среда Гисса. К 1% пептонной воде добавляют 0,5 % определенного углевода ( глюкозы, лактозы, мальтозы, маннита и др.) и индикатор Андреде (кислый фуксин в 1 N растворе NaOH). Затем разливают по пробиркам, в которые помещают поплавок (трубку длиной около 3 см, один из концов которой запаян) для улавнивания газообразных продуктов, образующихся при разложении углеводов. При стерилизации, которую проводят текучим паром или паром под давлением в 0,5 атм, поплавок заполняется питательной средой. Среда при рН 7,2- 7,4 бесцветна. При разложении углевода среда приобретает красный цвет.