Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Окраска капсул бактерий. Для облегчения микроскопирования капсулы можно сделать видимыми, проведя негативную окраску мазка по Бурри-Гинсу или Хиссу либо с помощью реакции набухания по Найфельду (см. ниже). В состав большинства бактериальных капсул входят сложные полисахариды. Капсулы также могут содержать соединения азота (например, у пневмококков капсула состоит из полисахаридов, глюкозамина и глюкуроновой кислоты), но могут и не содержать азот (например, капсулы лейконостоков состоят из декстрана, левулана, фруктозана и других полимеризованных моносахаров). Капсулы некоторых болезнетворных бактерий (например, Bacillus anthracis) формируют полисахариды и полипептиды, образованные мономерами D -глутаминовой кислоты. Поскольку D-аминокислоты устойчивы к воздействию протеаз, такая капсула лучше защищает бактерию от ферментативных воздействий фагоцитов.
Капсульные Аг (К-Аг) многих патогенных бактерий проявляют выраженные иммуногенные свойства (например, вакцины против пневмококковых и менингококковых инфекций готовят из материала капсулы). Связывание AT с капсулой изменяет её светопреломляющие характеристики, вызывая кажущееся набухание капсулы, видимое при соответствующих условиях освещения под микроскопом и известное как реакция Найфельда.
При методе Гинса-Бурри – для выявления капсульных бактерий - на черном фоне видны бесцветные капсулы и красного цвета бактерии. Для этого культура микробов смешивается с тушью и растирается по стеклу в виде мазка крови, просушивается на воздухе. Фиксируется. Затем капается фуксин на 2–3 мин. Промывается водой, просушивается и микроскопируется.

Рисунок13.Окраска кислотоустойчивых бактерий по Цилю - Нильсону. A-возбудитель; B- возбудитель туберкулёза.

Метод Циля – Нильсена для окраски кислотоустойчивых бактерий. В составе клеточной стенки и цитоплазмы имеются миколовая кислота, карболовая кислота, липиды и жирные кислоты, которые повышают тинкториальные свойства бактерий. При нанесении 5% серной кислоты или 3 % солянокислого спирта кислотонеустойчивые бактерии обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим.

Для окраски необходимо:
1. Фиксированный мазок окрашивают карболовым фуксином через полоску фильтровальной бумаги;
2. Подогревают до появления паров (3 - раз)
3. Снимают бумагу.
4. Обесцвечивают препарат 5 % серной кислотой или 3% солянокислым спиртом.
5. Промывают водой.
6. Окрашивают метиленовым синим – 3–5 мин.
7. Промывают водой. Сушат.
8. Приготовленный мазок микроскопируют.
Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, некислотоустойчивые - в синий цвет.