|
Примечание: Ошибки при окрашивани по методу Грама, их значение и избежание повторных ошибок
При приготовлении мазка взятие большого колличества культуры микроорганизмов приводит к не качественному их окрашиванию.
Основным дифференцирующим веществом при окрашивание по методу Грама является 960этиловый спирт. Если недодержать спирт, то грампотрицательные бактерии не обесцветятся и останутся фиолетовыми.Если передержать, то грамположительные бактерии потеряют фиолетовое окрашивание, в итоге при окрашивании фуксином могут стать красного цвета. Поэтому при работе со спиртом нужно учитывать время.
3- ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
“СТРУКТУРА БАКТЕРИЙ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ В СЛОЖНЫХ МЕТОДАХ ОКРАСКИ. МЕТОД БУРРИ-ГИНСА, МЕТОД ЦИЛЬ-НИЛЬСЕНА”
Цель лабораторной работы .
Изучение отдельных ультраструктурных элементов микроорганизмов с целью диагностики возбудителя инфекций.
Педагогические задачи:
Объяснить особенности строений микроорганизмов и структуры кислотоустойчивых бактерий;
Показать окрашивание микроорганизмов по методу Бурри-Гинса и Циль-Нильсена.
Итоги занятия
Студент должен знать:
Структуру (капсула, особенности клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий) микроорганизмов
Строение капсулы микроорганизмов и выявление её методом Бурри-Гинса
Строение клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий и окраску их по методу Циль-Нильсена.
Студент должен уметь:
Определить капсулу бактерий по методу Бурри-Гинса;
Определить кислотоустойчивые бактерии по методу Циль-Нильсена.
Теоретическая часть
Капсула бактерий.
Многие прокариоты секретируют на своей поверхности вещество, называемое гликокаликсом. Гликокаликс (то есть сахарное покрытие) является общим термином, используемым для веществ, которые окружают клетки. Бактериальный гликокаликс представляет собой вязкий (липкий), желеобразный полимер, который является внешним по отношению к клеточной стенке и состоит из полисахарида, полипептида, или и того и другого. Его химический состав колеблется в широких пределах в зависимости от вида бактерий. Многие бактерии синтезируют гликокаликс внутри клетки и секретируют его на поверхность клетки. Если вещество организовано и прочно прикреплено к клеточной стенке, то гликокаликс описывается как капсула. Наличие капсулы может быть определено с помощью негативного окрашивания. Если вещество неорганизовано и только слегка прикреплено к клеточной стенке, то гликокаликс описывается как слизистый слой. У некоторых видов, капсулы имеют важное значение в содействии бактериальной вирулентности (степень, в которой патоген вызывает заболевание). Капсулы часто защищают патогенные бактерии от фагоцитирующих клеток хозяина. Например, Bacillus сибирской язвы образует капсулы из Д-глутаминовой кислоты. Предполагают, что капсула может защитить его от разрушения фагоцитозом - активными клетками, потому, что только инкапсулированные B. аnthracis вызывают сибирскую язву. Другой пример пневмококк, который вызывает воспаление легких только тогда, когда клетки защищены полисахаридной капсулой. Неинкапсулированные S.pneumoniae, не могут вызвать воспаление легких и легко фагоцитируются. Полисахарид капсулы клебсиелл также предотвращает фагоцитоз и позволяет бактерии удерживаться и колонизировать в дыхательных путях. Гликокаликс является очень важным компонентом, участвующим в образовании межклеточных связей. Гликокаликс, который выполняет такую функцию, называется внеклеточным полимерным веществом (ВПВ). ВПВ защищает клетки, облегчает обмен информацией между ними, и позволяет клеткам выжить путем прикрепления к различным поверхностям в их естественной среде обитания. Через связи между клетками, бактерии могут расти на различных поверхностях таких, как камни в быстро движущихся потоках, на корнях растений, на человеческих зубах. Str. мutans, является важной причиной кариеса и прикрепляется к поверхности зубов с помощью гликокаликса. Str. мutans может использовать свою капсулу в качестве источника питания, расчленяя его, когда запасы энергии являются низкими. Холерный вибрион образует гликокаликс, который способствует его прикреплению к клеткам тонкой кишки. Гликокаликс также может защитить клетки от обезвоживания, а его вязкость может препятствовать движению питательных веществ из клетки.
Итак, клеточную оболочку многих бактерий окружает слой аморфного, сильно обводнённого вещества. Этот покров выполняет важные функции: делает оболочку клетки (состоящей из клеточной стенки и ЦПМ) более плотной и прочной, предохраняет бактерии от воздействия бактерицидных факторов, обеспечивает адгезию на различных субстратах, может содержать запасы питательных веществ. Организация капсул бактерий. Основную роль в организации капсул бактерий играет ЦПМ. Выделяют микрокапсулы (выявляемые только при электронной микроскопии в виде слоя мукополисахаридных микрофибрилл) и макрокапсулы (обнаруживают при световой микроскопии).
У некоторых бактерий полимеры клеточной оболочки, выделяемые наружу, свободно располагаются вокруг неё, образуя слизистый слой. Капсулированные бактерии могут превращаться в бескапсульные варианты и, поскольку первые образуют мукоидные или гладкие (S), а бескапсульные — шероховатые (R) колонии, это явление известно как S- и R-диссоциация. Капсула или слизистый слой не препятствуют поступлению и выходу различных веществ из бактериальной клетки, а также плохо удерживают красители.
Рисунок12. Окраска капсул бактерий: 1-Пневмаккок окрашен по методу Грам; 2-Клебсиеллы окрашены по методу Бурри-Гинса.
Do'stlaringiz bilan baham: |
