|
Метод тонкослойной (планарной) хроматографии (ТСХ), получивший в настоящее время широкое распространение, был разработан Н. А. Измайловым и М. С. Шрайбер в 1938 г.
Метод ТСХ – простой, дешевый, оперативный метод хроматографии для анализа всех классов соединений. В методе ТСХ неподвижная твердая фаза тонким слоем наносится на пластинку. В 2–3 см от края пластинки на стартовую линию наносят пробу анализируемой жидкости и край пластинки погружают в растворитель, который действует как подвижная фаза жидкостной адсорбционной хроматографии. Под действием капиллярных сил растворитель движется вдоль слоя сорбента и с разной скоростью переносит компоненты смеси, что приводит к их разделению. Диффузия в тонком слое происходит в продольном и поперечном направлениях, поэтому процесс следует рассматривать как двумерный.
Для разделения используются стеклянные, металлические, пористые керамические и пластмассовые пластины размером 100 100 мм и другие пластины с однородным слоем адсорбента толщиной 50–300 мкм. Фракция зерен адсорбента может быть в пределах 3–15 мкм. Применяют стеклянные пластинки, на поверхности которых спекают слои адсорбента (такие пластины можно использовать повторно), а также пластины на основе стекловолокна (Instant thin-layer chromatography).
Основными адсорбентами для пластин в ТСХ являются силикагель, оксид алюминия, микрокристаллическая целлюлоза, триацетат целлюлозы для разделения комплексов металлов, а также неорганические ионообменники, хитозан. Для препаративной хроматографии используют пластины с изменяющейся толщиной адсорбционного слоя. По адсорбционной активности пластины подразделяются на полярные, неполярные и средней полярности. К некоторым пластинам для повышения чувствительности детектирования добавляются флуо-
ресцирующие вещества (флуоресцеин, пирен и др.).
Кроме пластин в ТСХ для разделения используются стержни
(150 0,9 мм) из стали, меди или кварца. После разделения смеси и высушивания стержни с постоянной скоростью пропускаются через пламя ионизационно-пламенного детектора. Эти стержни можно использовать многократно (до 100 раз).
Качественный анализ в ТСХ. Наиболее общий подход к качественному анализу основан на значениях подвижности. Хроматографическая подвижность является чувствительной характеристикой ве-
щества, однако она существенно зависит от условий определения. При соблюдении стандартных условий получаются воспроизводимые значения подвижности, которые можно использовать в аналитических целях при сравнении с табличными, если они получены в тех же условиях опыта.
Самым надежным является метод свидетелей, когда на стартовую линию рядом с пробой наносятся индивидуальные вещества, соответствующие предполагаемым компонентам смеси. На практике стандартное вещество (свидетель) в том же растворителе наносится на стартовую линию вместе с анализируемой пробой и хроматографируется в тех же условиях.
Количественный анализ в ТСХ. Количественные определения в ТСХ могут быть сделаны непосредственно на пластинке либо после удаления вещества с пластинки. При непосредственном определении на пластинке измеряют тем или иным методом площадь пятна (например, с помощью миллиметровой кальки) и по заранее построенному градуировочному графику находят количество вещества.
Наиболее точным считается метод, в котором вещество после разделения удаляется с пластинки и анализируется спектрофотометрическим или иным методом. Удаление вещества с пластинки обычно производят механическим путем, хотя иногда применяют вымывание подходящим растворителем.
К основным преимуществам ТСХ относятся: одновременное разделение нескольких проб (до 20 и более), возможность двумерного разделения, возможность наблюдать весь процесс разделения, высокая производительность; полный анализ (на старте можно проверить остатки пробы), быстрота разделения; низкая стоимость, небольшое количество элюента, возможность широкого выбора цветных реакций, возможность применения селективных и специифических детекторов.
Do'stlaringiz bilan baham: |
