|
6. Kumarinlarni ajratib olish usullari va identifikatsiyasi
Kumarinlarni olishning turli usullari tasvirlangan. Odatda, kumarinlarni olish quruq yoki yangi materialda, strukturaning turiga qarab turli xil qutbli erituvchilar bilan amalga oshirilishi mumkin. Ba'zi kumarinlar apolyar erituvchilarda kam eriydi va ko'pincha erituvchini sovutish yoki konsentratsiyalash orqali to'g'ridan-to'g'ri kristallanishi mumkin.
Miranda va Kuellar (2001) o'zlarining "Farmacognosia y Productos Naturales" nomli kitoblarida Soxlet usulidan foydalangan holda to'rtta variantga rioya qilish imkoniyatini ko'tardilar:
Soxhlet quruq kukunli materialni neft efiri bilan 3 kun davomida uzluksiz ekstraktsiya qiladi. Efir ekstrakti dastlabki hajmning 1/5 qismigacha konsentratsiyalanadi va ekstraktning kristallanishini olish uchun sovutiladi. Kumarinlar olingan qattiq moddada taqdim etiladi.
Quruq material chiqariladi va kamida 2-3 kun davomida Soxhlet yordamida doimiy ravishda etanol bilan püskürtülür. Ekstrakt vakuum ostida yog'li qoldiqgacha konsentratsiyalanadi. Bu qoldiq bir necha marta issiq suv qismlari bilan yuviladi. Suvli yuvishlar birlashtiriladi va minimal hajmgacha konsentratsiyalanadi, 10% xlorid kislota eritmasi bilan kislotalanadi. Aralash 30 daqiqa davomida qaytariladi. Agar bir oz cho'kma paydo bo'lsa, u filtrlanadi (issiq filtrlash) va eritma sovishini kutadi. Kristallar filtrlash orqali yig'iladi va ularda kumarinlar topiladi.
Mavjud materiallar etil efir bilan yoki Soxhlet apparati bilan ketma-ket maseratsiyalar orqali chiqariladi. Ekstrakt quruq bo'lguncha konsentratsiyalanadi va qoldiqda kumarinlar mavjud.
Quritilgan va maydalangan o'simlik materiali aseton bilan doimiy ravishda Soxlet apparatida kamida 3 kun davomida ekstraksiya qilinadi va ekstrakt quruq bo'lgunga qadar konsentratsiyalanadi, bu esa kumarinlarni o'z ichiga olgan qoldiq hosil qiladi.
Turli ekstraktlar tarkibidagi kumarinlarni tozalash va ajratish xromatografik ustunlar yordamida, alyuminiy oksidi tashuvchisi va erituvchi sifatida eluotropik qatorni qo'llash orqali amalga oshirilishi mumkin: benzol-geksan (1:2,5); benzol; xloroform; xloroform-aseton, chiziqli gradientning sof asetonga nisbatida [ 44 ]. Ta'riflangan tuzilmalarni tan olish uchun ba'zi sinovlar tasvirlangan, ular orasida:
Emerson reagenti qo'llaniladigan kumarinning fenolik o'rnini bosuvchi ranglarini taniydiganlar.
Lakton guruhlari mavjudligini kuzatish mumkin, bu esa muhitda pH o'zgarishiga olib keladi. Kumarinlar etanolda eritilsa, eritmalar kislotalanganda rangini o'zgartiradi (sariq rang yo'qoladi).
Furan halqasini Erlich testi yordamida tanib olish mumkin. Ekstrakt dimetilamino-benzaldegid (5% etanol) eritmasi bilan ishlanadi, so'ngra gazsimon xlorid kislotaning ko'piklanishi bilan kislotalanadi. To'q sariq rang ijobiy testni ko'rsatadi.
Oxirgi test odatda o'simliklarni tadqiq qilishda o'tkaziladigan fitokimyoviy skrining uchun ishlatiladi. Ushbu yondashuvni qo'llagan holda, Payo va boshq., (1996), skrining qilingan 39 kuba turidan 51,2% kumarin testi uchun ijobiy ekanligini aniqladi.
Kumarinlarda ishlatiladigan boshqa ekstraksiya usullari: mikroto'lqinli pech, sonikatsiya va superkritik suyuqlik ekstraktsiyasi (SFE) [ 136 ], bu testlar tabiiy mahsulotlarni izolyatsiya qilish uchun kapillyar elektroforezni ham taklif qiladi.
Shuning uchun kumarinlarni ajratish va tahlil qilishda turli xil usullar qo'llaniladi: xromatografiya (qog'oz xromatografiyasi, yupqa qatlam xromatografiyasi, gaz xromatografiyasi va yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi), titrimetrik va spektrofotometrik (kolorimetrik va polarografik) usullar [ 1 ].
Kumarin xarakterli xromofor guruhlari va uning 300 nm atrofida kuchli UV yutilishi tufayli, ultrabinafsha-ko'rinadigan spektroskopiya (UV-vis) [ 137 ] kabi mumkin bo'lgan usullar bilan aniqlanishi mumkin. UV-vis detektori yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida (HPLC) qo'llaniladi, shuningdek, suyuq xromatografiya (LC) - fotodiodli massiv detektori (PDA), massa spektrometriyasini LC-ga ulash kabi tabiiy mahsulotlarni tavsiflash va miqdorini aniqlash uchun boshqa chiziqli usullar qo'llaniladi. [ 137 ], yoki Mass Spektrometriya (UPLC-MS) bilan birlashtirilgan Ultra Performance Suyuq Xromatografiya [ 138 ].
Braziliya dorivor o'simlik "guako" da kumarinlarni aniqlash uchun oddiy spektroskopik usul [ 35 ] va HPLC [ 85 ] ishlatilgan.Mikaniya glomerata(Asteraceae). Coumarin HPLC aniqlash, shuningdek, asoslangan sedativ o'simlik dori standartlashtirish uchun Kubada ishlatiladiJusticia pektoralis(Acathanceae).
Do'stlaringiz bilan baham: |
