И правила работы в лаборатории биохимии

разделять длинные фрагменты ДНК. Процесс разделения фраг- 
ментов ДНК весьма чувствителен: фрагменты длиной до 500 поли-
нуклеотидов (ПН) разделяются, даже если они отличаются всего
на 1,0 нуклеотид. Это позволяет, используя гели различной концент-
рации, разделять молекулы ДНК в широком диапазоне их размеров, 
вплоть до 50 тысяч ПН. Процесс разделения прекращается, когда 
размер глобул превышает максимально возможный размер пор.
Для электрофореза двунитевых молекул ДНК используют 
обычно 50 мМ трис-боратный буфер (ТВЕ) рН 7,5–7,8.
Для выявления ДНК в препараты добавляют этидиум бро-
мид – химическое вещество из группы фенантридинов (3,8-диамино-
6-этил-5-фенилфенантридиумбромид), флуоресцирующее при облу-
чении УФ-светом: 

---

50 
Структурная формула этидиум бромида 
Этидиум бромид является интеркалирующим агентом, т. е. 
веществом, способным встраиваться между основаниями ДНК; его 
интеркаляция сопровождается раскручиванием суперспирализован-
ных участков ДНК. Этидиум бромид позволяет выявлять до 0,05 мкг 
двунитевых ДНК в одной зоне. 
Оценку размеров ДНК в зонах производят, опираясь на 
данные о размерах фрагментов (рестриктов) секвенированных 
молекул ДНК. Как правило, в качестве реперных (маркерных) 
фрагментов известной длины используют рестрикты ДНК фага X, 
для которых предназначают одну из дорожек гелевой пластинки. 
Они позволяют определять размеры рестриктов изучаемой ДНК. 
Кроме того, зная концентрацию реперной ДНК, можно по степени 
интенсивности зон сделать оценку количества ДНК в изучаемых 
препаратах. 
Гель-электрофорез используют нe только для аналитических,
но и для препаративных целей. Известно, что связывание белка
с фрагментом ДНК уменьшает его электрофоретическую подвиж-
ность, позволяя таким методом изучать особенности взаимодействия 
белок–ДНК. 
Виртуальную лабораторную работу «Электрофорез» можно 
посмотреть: 
1) на WEB-сайте DNA Learning Center, код доступа: 
http://www.dnalc.org/resources/animations/gelelectrophoresis.html 
2) Greg Petersen· 45 видео «Gel loading and electrophoresis» 
(«Приготовление геля и электрофорез») код доступа: 
3) http://www
.youtube.com/watch?v=Wwgs-FjvWlw&NR=1 

Gel_Electrophoreis_Lab_Activity_CAES_UGA.
ppt
 
www.gaaged.org/.../Gel_Electrophoreis_Lab.
-

---

51