Городской научно – практический марафон «Шаги в науку». I этап Секция «Химия» «Исследование состава и качества мороженого»

Определение содержания белка методом Лоури
Принцип метода: Определение белка основано на образовании окрашенных продуктов ароматических аминокислот с реактивом Фолина-Чокальтеу в сочетании с биуретовой реакцией на пептидные связи.
Метод характеризуется высокой чувствительностью (концентрация открытия белка 5 мкг/мл)
Реактивы:

1. 
   Реактив «А₁» - 4% Na₂CO­_3, 100 мл;
   
2. 
   реактив «А₂» - 0,1н NaOH, 100 мл;
   
3. 
   реактив «В₁» - 2% K-Na тартрат- 10 мл;
   
4. 
   реактив «В₂» 1% CuSO₄- 10мл;
   
5. 
   реактив «С», готовится смешиванием в соотношении 50: 50: 1:1 соответственно А₁, А₂, В₁, В₂; Реактив Фолина (фосфомолибденофенольная смесь);
   
6. 
   Стандартный раствор белка -100 мкг/мл бычьего сывороточного альбумина (БСА)
   

Оборудование:
Фотоэлектрокалориметр (ФЭК)
Ход работы:
1. Построение калибровочного графика:
Разведение 10-100 мкг/мл с шагом 10 мкг/мл.

Опыт	Контроль
1 мл исследуемого образца	1 мл дистиллированной воды
2 мл реактива «С»	2 мл реактива «С»
Инкубация 10 минут при комнатной температуре	Инкубация 10 минут при комнатной температуре
0,2 мл реактива Фолина	0,2 мл реактива Фолина
Инкубация 40 минут при комнатной температуре	Инкубация 40 минут при комнатной температуре
Колориметрирование на ФЭК при =750 нм	Колориметрирование на ФЭК при =750 нм

Проводят опыт в трех измерениях
Расчетные формулы:

P – разведение
С – концетрация белка


ρ=1,11 г/мл – средняя плотность мороженого в группе пломбиров.