Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г.
170
является изменчивость его морфологических признаков и сложность
определения видов. Самое главное,
отсутствие или ненадежность
определителей, связанных с таксономией, приводит к затруднениям в их
изучении. Кроме того, создание устойчивых к болезням новых сортов тоже
становится причиной появления новых рас патогенов.
Вилт
наносит вред многим культурам, возделываемым в стране. Хотя
селекционеры создали несколько устойчивых к этой болезни сортов
хлопчатника, эти сорта содержат в себе другие негативные показатели. В
связи с этим в центре Геномики и биоинформатики проводится глубокий
анализ геномов растений, что дает возможность полного изучения
вышеизложенных
болезней и генов, ответственных за формирование
комплексных признаков. За счет использования современных технологий
редактирования геномов можно получить формы хлопчатника, устойчивые к
воздействию внешней среды. Для этого нужно изучить возбудителя болезни
с молекулярной стороны.
В настоящее время выявлено 120 видов заболеваний хлопчатника.
Изучение природы патогенов и с помощью этого нахождение способов их
ликвидации считается важной задачей. Если выявление возбудителей вилта
станет легче, то выростет возможность предсказания
опастности заражения
хлопчатника, а также создание устойчивых сортов.
Имеются гены
LAE1
, которые управляют формированием микро и макро
конидий
Fusarium
и которые становятся причиной гибели растения. Эти гены
секвенированы из местных рас гриба FOV. Кроме этого секвенирован и
клонирован ген
FoSTUA
из расы гриба FOV, управляющий вторичными
метаболитами, бикаверином, фумонизином,
фузариозной кислотой и
синтезом фузариоза. Эти гены и их фрагменты были выбраны для
составления конструкций бинарных векторов на основе технологии РНК
интерференции (RNAi). При нокауте гена
LAE1
в патогенах,
попавших в
организм растения останавливается формирование спорогенеза и конидий. В
Материалы конференции «Современные проблемы генетики, геномики и биотехнологии», 18 мая 2016г.
171
результате патоген становится бесплодным. А при нокауте гена
FoSTUA
патоген не способен выделять фитотоксин.
С этой целью выбранные фрагменты гена клонированы в клонирующий
вектор ТОРОТА и после нескольких этапных реакций гены
FoSTUA
и
LAE1
были трансформированы в вектор pHellsGate-8. Трансформанты были
проверены на основе ПЦР скрининга. После этого, RNAi
pHG8_FoSTUA
и
pHG8_LAE1
размножены в селективной среде с антибиотиками
гентомицином и спектономицином. В целях
изучения функций этих генов
векторы RNAi
pHG8_FoSTUA
и
pHG8_LAE1
были трансформированы в
новые открывшиеся цветки модельного растения
Arabidopsis thaliana
с
помощью агробактерии со штаммом GV 3101.
В настоящее время продолжаются работы по посеву семян
трансформантов в почву, и из них
выделяются ДНК и проводится
генотипирования.
Do'stlaringiz bilan baham: