Gen regulyatsiyasi molekulyar mexanizmlari. Transformatsiya va transduksiya. Mundarija: Kirish

Vaqtinchalik transfeksiya. Vaqtinchalik transfeksiyada kiritilgan nuklein kislotasi hujayrada faqat ma'lum vaqt davomida mavjud bo'lib, genomga qo'shilmaydi. Shunday qilib, vaqtincha o'tkaziladigan genetik material hujayra bo'linishi paytida avloddan -avlodga o'tmaydi va uni atrof -muhit omillari ta'sirida yo'q qilish yoki hujayra bo'linishi paytida suyultirish mumkin. Ammo, o'tkaziladigan genetik materialning ko'p sonli nusxasi, u hujayrada mavjud bo'lgan davrda yuqori darajada ifoda etilgan oqsillarga olib keladi. Amaldagi konstruktsiyaga qarab, vaqtincha ifodalangan transgen odatda 1 dan 7 kungacha aniqlanishi mumkin, lekin vaqtincha o'tkaziladigan hujayralar odatda transfektsiyadan 24-96 soat o'tgach yig'ib olinadi. Gen mahsulotlarini tahlil qilish uchun fermentativ faollik tahlillari yoki immunoassay uchun RNK yoki oqsilni ajratish talab qilinishi mumkin. Optimal vaqt oralig'i hujayra turiga, tadqiqot maqsadlariga va kiritilgan genning o'ziga xos ekspressiv xususiyatlariga, shuningdek, muxbirning barqaror holatga yetishi uchun zarur bo'lgan vaqtga bog'liq. Biroq, bir necha kun ichida xorijiy DNKning ko'p qismi nukleazalar bilan parchalanadi yoki bir haftadan so'ng hujayra bo'linishi bilan suyultiriladi, endi uning mavjudligi aniqlanmaydi. Vaqtinchalik transfeksiya DNKni o'ta o'ralgan plazmididan foydalanganda eng samarali bo'ladi, ehtimol uning hujayra tomonidan yanada samarali qabul qilinishi tufayli. siRNKlar, miRNKlar, mRNKlar va hatto oqsillar ham vaqtinchalik transfeksiya uchun ishlatilishi mumkin, lekin plazmid DNKda bo'lgani kabi, bu makromolekulalar ham yuqori sifatli bo'lishi va nisbatan toza bo'lishi kerak (qarang: Transfektsiya samaradorligiga ta'sir qiluvchi omillar). Transfektsiyalangan DNK transkripsiya uchun yadroga ko'chirilganda, transfektsiyalangan RNK sitozolda qoladi, u erda transfeksiya qilinganidan keyin bir necha daqiqa ichida ifodalanadi (mRNK) yoki maqsad gen (siRNK va miRNK) ifodasini o'chirish uchun mRNK bilan bog'lanadi (ko'rsatmalarga qarang. RNK transformatsiyasi).