Экспериментальные

Метод почвенных микрокосмов. Опыты по ис- следованию развития актиномицетов в почвах при разных температурах проводили с использо- ванием почвенных микрокосмов. Наблюдали за изменением длины мицелия и биомассы почвен- ных актиномицетов в ходе микробной сукцессии, инициированной увлажнением (60% от полной влагоемкости) бурой пустынно-степной почвы. Подготовку почвы и инициацию микробной сук- цессии увлажнением проводили согласно тради- ционно используемой методике [16]. Инкубиро- вание почвы проводили в термостатах при темпе- ратурах 28 и 45°C. Длину мицелия актиномицетов в почве определяли с помощью люминесцентного микроскопа на 0, 4, 10, 17 сутки после инициации сукцессии. Для окрашивания мицелия использо- вали водный раствор акридина оранжевого (раз- ведение 1 × 10000; 2–4 мин). Длину мицелия в 1 г почвы вычисляли по формуле:
N = S₁ a n/v S₂ c, (1)
где: N – длина мицелия (мкм) (число клеток) в 1 г почвы; а – средняя длина мицелия в поле зрения (усреднение проводилось по всем препаратам); S₁ – площадь препарата (мкм²); n – показатель разведения почвенной суспензии (мл); v– объем капли, наносимой на стекло (мл); S₂ – площадь
поля зрения микроскопа (мкм²); с – навеска поч- вы (г).
При расчете биомассы учитывали, что 1 м су- хого актиномицетного мицелия диаметром
0.5 мкм имеет биомассу 3.9 × 10^–8 г [16].
Оптимальные и ограничительные для роста культур стрептомицетов температуры определяли по величине радиальной скорости роста колоний на плотной питательной среде Гаузе 1 [10] при температурах 5, 8, 10, 15, 20, 28, 37, 45, 50 и 55°С. Расчет радиальной скорости роста колоний про- водили по формуле:
K_r = (d₂ – d₁)/(t₂ – t₁),
где: d₁ и d₂ – диаметр колонии (мм) в начальный и конечный моменты измерения соответственно; t₁ и t₂ – время (сут) начального и конечного измере- ния. Измерения проводили в 20-кратной повтор- ности.12121
В опытах по определению ксеротолерантности умеренного термофильного стрептомицета Strep) tomyces sp. 315 FR716528 различные уровни влаж- ности создавали в эксикаторах при помощи насы- щенных растворов различных солей. Создавали три уровня влажности воздуха, соответствующие различным уровням давления влаги в почве (P) (а_w): –96.4 МПа (а_w 0.50) – эксремально низкий,
⎯22.6 МПа (а_w 0.86), приблизительно соответ- ствующий максимальной адсорбционной влаго- емкости почвы (МАВ), и –2.8 МПа (а_w 0.98), со- ответствующий максимальной гигроскопической влажности почвы. Для приготовления препарата каплю моноспоровой суспензии стрептомицета (10⁶ спор/мл) наносили на предметные стекла и помещали в эксикатор с заданной влажностью при температуре 28 и 45°С. Уровни влажности воздуха в эксикаторах контролировали при помо- щи цифрового термовлагометра VIring AB с по- грешностью измерения не более 1%. Стекла про- сматривали с помощью люминесцентного мик- роскопа ZEIZZ Axioskop 2 plus (Германия) после экспозиции 6, 24, 48 и 72 ч. Для каждого срока ин- кубации на предметном стекле подсчитывали число непроросших, проросших спор (с ростовы- ми трубками) и определяли длину проростков ми- целия. Стекло в эксикатор после просмотра не возвращали.