3.2 Резус мосликни аниқлаш: Резус системаси 6 та антиген (D, d, C, c, E, e) ни ўз ичига олади, булар ўз навбатида мос келучи анти зардоб билан аниқланади. Бунданда актив бўлган, шакbлланган изоиммун антитела бўлиб антиген D бўлиб ҳисоьланади ва бу резус фактор номини олади.
- Антиген D бор бўлган шаxс Резус - мусбат (+)
- АнтигенD йўқ бўлган шаxс Резус - манфий ( – ) дейилади.
1. Экспресс усул ёрдамида резус -факторни аниқлаш.
Бу усулда таёрлаб кўйилган иккита серияли универсал реагент анти-резус қўлланилади. Ўрганилаётган қон билан параллел қилиб назорат ўрганилаётган стандарт резус мусбат эритроцит (бир гуруҳга тегишли бўлган ўрганилаётган эритроцит О(I) ва резус (-) манфий эритроцит, ўрганилаётган гуруҳга тегишли бўлиши керак).
Штативга 3 қатор пробиркага 10 мл ўрганилаётган эритроцитни Ф.И.Ш. ёзуви билан жойлаштирилади ва иккита пробиркада эса назорат учун ўрганилаётгани биланқўйилади.
1-қатордаги хамма пробиркага ики томчидан битта серияда тегишли бўлган антирезус стандарт реагент, 2-қатордаги пробиркаларга бошқа серияга тегишли антирезус реагентиқўйилади. 3-қатордаги пробиркаларга икки томчи физиологик эритма ва бир томчи 33% ли полиглюкин қуйилади. Барча пробиркаларга бир вақитда бир томчи ўрганилаётган қондан томизилади. Пробиркани таркибини аралаштириб чайқатилади, ундан сўнг секинлик билан атрофига айлантирилади, пробиркани горизонтал ҳолатда бурилади, пробиркани таркиби девор бўйлаб оқиши учун. Эритроцит агглютинацияси 1- мин. оxирида бошланади, лекин мустахкам комплекс хосил бўлиши учун пробиркани 3 минутдан олдин айлантирмаслик керак. 3 минутдан сўнг пробиркага 4-6 мл физиологик эритма қўшилади. Шундан сўнг пробирка 2-3марта айлантирилади (чайқатилмайди) пробирка лупа ёки оддий кўз билан кўрилади. Натижа агглютинация бор ёки йўқлиги билан бахоланади. (резус мусбат) эритроцит учун агглютинацияни топилиши қизил қон чўкмалар кўринишида суюқликни ёруғланиш фонида кўриш мумкин. (резус манфий) эритроцит гомоген бўялган суюқлик визуаллашади, секин чайиш тўлкини билан xарактерланади. Мусбат реакцияни стандарт резус + эритроцит билан манфий реакция стандарт минус эритроцитни контрол намунани текширгандан сўнг натижани хақиқий деб ҳисобласа бўлади. Барча 3-қатордаги пробиркаларда агглютинация кузатилмаслиги керак .
2. Қон агглютинация усули ёрдамида 46-460С қиздирилган пробиркада 10% ли желатин билан резус факторни аниқлаш.
Бу усулни аниқлаш учун стандарт зардоб антирезус анти - D тўлик бўлмаган антитаначалар қўлланилади. Ҳар бир қатор ўрганилаётган эритроцит намуналари миқдори бўйича 10 мл ҳажмли пробиркада ва иккитадан резус - мусбат ва резус манфий стандарт эритроцитлар штативга ўрнатилади. Ҳар бир қатордаги иккита пробиркага Ф.И.Ш. ёзиб кўйилади. Бир xил ифодаланган пробиркаларга маркировкага мувофик ўрганилаётган эритроцитларданбир томчи қуйилади; назорат пробиркасига стандарт резус мусбат ва бир томчи стандарт резус манфий эритроцитдан томизилади. Олдиндан 46-480С да қиздириб тайёрланган 10%ли желатин эритмасидан хамма пробиркага икки томчидан қуйиб чиқилади. Желатинни қўллашдан олдин унинг ҳолати, тез минутларда желатиннинг хиралашиши, ёстикчаларини хосил бўлиш яроксизлиги кўриб бахоланади. Бундан ташқари+4– +80С да совиш xусусиятини йўқотган желатин қўлланилмайди. Хамма 1- қатордаги пробиркаларга битта серияга оид тўлиқ бўлмаган антитаначаларга эга бўлган анти-резус зардобдан икки томчи, 2- қаторга эса бошқа серияли зардоб пробиркага қуйилади. 3-қаторга намуна учун ўрганилаётган эритроцитларни носпецифик агглютинацияни кузатиш учун текширилади. Пробиркадаги таркиб силкитиб аралаштирилади; пробиркали штативлар +46– + 480С ли суъний хаммомга 10 минутга +370С ли қуруқ хаволи термостатга 30 минутга кўйилади.Вақти тугагач термостат ёки сувли хаммомдан пробирка олинади, 5-8 мл физиологик эритма қуйилиб пробиркани икки карра айлантириб таркиб чайқатилади. Эритроцитларни агглютинацияси йўқлигига қараб пробиркани оддий кўз ёки лупа ёрдамида натижа бахоланади. Натижа мусбат агглютинация бўлса бунда ёруғ суюқлик фонида ҳар xил қизил донали бўлиб кўринади. Анти-Д зардоб билан агглютинация берган намунали эритроцитлар мусбат-резусли ҳисобланади, манфий натижани берган пробиркада бир текис бўялган, лойкаланган суюқлик кўринади. Анти-Д зардоб билан агглютинация бермаган намуна резус манфий ҳисобланади. Натижа назоратдаги намуна пробиркаларини қайтар текширишда чин ҳисобланади.
а)Бир xил номли эритроцит гуруҳи стандарт резус манфий билан агглютинация кузатилмаганда ва бир xил номли группалар ёки О(I) группали эритроцит билан стандарт резус мусбат агглютинация кузатилади.
б) Учинчи қатордаги пробиркаларда агглютинация кузатилмаганда( тўғри желатинли синама манфий ). Агар тўғри желатинли синама мусбат бўлса, агглютинацияаутоантитела натижасида кузатилган. Анти-резус зардоб билан мусбат натижа хақиқий деб ҳисобланмайди. Бундай ҳолатларда ўрганилаётган эритроцитларни илик физиологик эритма билан ювиш тавсия этилади. Бу улардан аутоантитаначаларни элиминациялаш ва тадкикотни қайта такрорлаш учун керак.
