Биотехнология ответственный редактор академик И. И. Гительзон

донуклеазы (рестриктазы) и лигазы. Первые необходимы для получе-
ния однородных фрагментов ДНК, вторые – для их соединения. Рестрик-
тазы и лигазы в совокупности с другими ферментами (нуклеазами, обрат-
ной транскриптазой, ДНК-полимеразой и др.) обеспечивают проведение 
всех генноинженерных манипуляций.
Техника генетического конструирования in vitro включает несколько 
последовательных процедур (рис. 4.1): 
1) получение нужного гена;
2) встраивание его в генетический элемент, способный к репликации 
(вектор);
3) введение гена, входящего в состав вектора, в организм-реципиент;
4) идентификацию (скрининг) и отбор клеток, которые приобрели же-
лаемый ген или гены.
ДНК
ДНК
5’
5’
3’
3’
G
G
G
G
A
A
A
A
A
A
T
T
T
T
T
T
C
C
C
C
Эндонук
л
еа
за
Эндонуклеаза
Расщепленная
плазмида
Рекомбинантная
плазмида
Введение
рекомбинантной
плазмиды
в кишечную
палочку
Плазмида
Чужеродный ген (ДНК)
Клонирование гена
Лигаза
Плазмиды
Хромосома
A
A
T
T
С
С
С
С
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
G
G
T
T
T
T
A
A
A
A
+
Рис. 4.1. Введение гена в плазмиду E. coli и клонирование рекомбинантной ДНК в клетках
(по А. Сассону, 1987).
Плазмида E.coli расщепляется рестриктазой в обеих частях ДНК с образованием на концах неспаренных 
нуклеотидов (ТТАА или ААТТ). Ген выщеплен с помощью этой же рестриктазы с образованием на концах, 
комплиментарных плазмиде, последовательностей (ААТТ и ТТАА). Обе ДНК (гена и плазмиды) сшивают с 
помощью лигазы. Гибридную плазмиду вводят в E. coli, которая при размножении образует клон, все клет-
ки которого содержат рекомбинантную плазмиду и чужеродный ген. Ген клонирован в бактериальной 
клетке и индуцирует в ней синтез белка. 

---

125