Bioorganik kimyo

10 – ISH. IMMUNOGLOBULINLARNI QON ZARDOBIDAN AJRATISH.

Ishning umumiy izohi. Hayvon (odam) qoni zardobidan 50% to’yinish darajasida ammoniy sulfat bilan cho’ktirish orqali immunoglobulinlar qismi cho’ktiriladi, ortiqcha tuzni chiqarib yuborish uchun dializ qilinadi va imkoniyat bo’lsa, liofillab quritiladi.

Jihozlar va reaktivlar. 50 ml li stakan 2 dona, tsentrifuga vakum filtrlagich qurilmasi, SF – 26, 10 ml qon zardobi, ammoniy sulfat dializ membranasi, hajmi 1 l bo’lgan dializ kamerasi.

Ishning borishi. Hayvon va odam qon zardobining immunoglobulinlari oqsillarning geterogen sinfidan m-tdir. (1 gA, 1gM, 1gD, 1gYe, 1gG). Ular antetolalar begona molekulalar paydo bo’lganida unga qarshi ishlab chiqariladigan moddalardir.

Antitelo o’ziga mos kelgan antigenni o’ta moyillik bilan sezib, uni, «bog’lab» oladi va antigenni neytrallashga hamda yo’qotishga moslaydi.

Qon zardobi immunoglobulinlarining asosiy massasi 1gG dan iborat bo’lib, cho’kmaga 30-50% darajada ammoniy sulfat tuzi bilan to’yintirilganda tushadi. 10 ml qon zardobiga (aralashtirib turib) asta-sekin 3,13 g amoniy sulfat tuzi qo’shiladi. Aralashma cho’kma hosil qilishligi uchun 30-40 min qoldiriladi. Globulinlar cho’kmasi 15 minut davomida 3-5 ming ayl/min tezlikda tsentrifugalanib yoki filtrlanib ajratiladi, zardobning dastlabki hajmidagi suv bilan eritiladi va 2 marotaba 1 l suvda (1-2 soat), 1 marotaba рН 7,4 bo’lgan 10 mm natriy fosfat buferida (1 soat) dializ qilinadi.

Fraktsiyalarning tozalik darajasini oshirish maqsadida qaytadan cho’ktirish odatdagidek olib boriladi. So’ngida amoniy sulfat bilan cho’ktirilgan va buferda dializlangan cho’kma imkoniyat bo’lsa, liofillab quritiladi.

Eritmani 260 va 280 nm dagi optik zichligi o’lchanadi va 1gG – ning kontsentratsiyasi hamda miqdori aniqlanadi. Globulinlar cho’kmasi