Аминокислот в белках, пептидах и лекарственных препаратах

разделением смеси аминокислот методом обращенно-фазовой ВЭЖХ со 
спектрофотометрическим детектированием в видимой области спектра.
ДАБС является хромофорным реактивом и используется для маркировки 
аминокислот. Аминокислоты, маркированные ДАБС (ДАБС-аминокислоты), 
обладают высокой стабильностью и проявляют максимум поглощения при 436 нм.
ДАБС-аминокислоты всех встречающихся в природе производных 
аминокислот могут быть разделены на колонке, заполненной силикагелем 
октадецилсилильным, методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием 
градиентного элюирования и подвижной фазы, состоящей из ацетонитрила и 
водной буферной смеси. Элюируемые из колонки ДАБС-аминокислоты 
определяют при длине волны 436 нм.
Метод позволяет проводить с одинаковой чувствительностью анализ как 
аминокислот, так и иминокислот (таких как пролин). Метод дериватизации с ДАБС 
позволяет количественно определять остатки триптофана, полученные при 
гидролизе белка/пептида с сульфоновыми кислотами (такими как кислота 
меркаптоэтансульфоновая, 
кислота 
п-толуолсульфоновая 
или 
кислота 
метансульфоновая) как указано в методе 2, описанном в разделе «Гидролиз 
белков». Другие лабильные остатки аминокислот, такие как аспарагин и глутамин, 
можно анализировать как и предыдущие после превращения их в кислоту 
диаминопропионовую и кислоту диаминомасляную соответственно, как указано в 
методе 11, описанном в разделе «Гидролиз белков».
В качестве внутреннего стандарта для этого метода не может быть 
использован норлейцин, так как он элюируется в области хроматограммы со 
скоплением пиков первичных аминокислот. В качестве внутреннего стандарта 
может быть использован нитротирозин, который элюируется в свободной от пиков 
области хроматограммы.
Предел обнаружения ДАБС-аминокислот обычно составляет 1 пмоль. 
Предел определения ДАБС-аминокислот — 2—5 пмоль. Для получения 
удовлетворительных данных рекомендуется для одного анализа использовать 
10
—30 нг ДАБС-производных белкового гидролизата. 
МЕТОД 
7. 
ПРЕДКОЛОНОЧНАЯ 
ДЕРИВАТИЗАЦИЯ 
С 
9-
ФТОРЕНИЛМЕТИЛХЛОРФОРМИАТОМ 
Предколоночная 
дериватизация 
аминокислот 
с 
9-
фторенилметилхлорформиатом (ФМФ) проводится перед разделением смеси 
аминокислот методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с флуориметрическим 
детектированием.

---

ФМФ взаимодействует с первичными и вторичными аминокислотами с 
образованием производных с сильной флуоресценцией. Реакция протекает в 
мягких условиях в водном растворе в течение 30 с. Полученные производные 
стабильны, за исключением подверженных деструкции производных гистидина. 
Несмотря на то, что ФМФ сам по себе обладает флуоресценцией, избыток ФМФ и 
флуоресцирующие побочные продукты реакции могут быть удалены без потерь 
ФМФ-аминокислот.
ФМФ-аминокислоты могут быть разделены на колонке, заполненной 
силикагелем 
октадецилсилильным, 
методом 
обращенно-фазовой 
ВЭЖХ.