4 laboratoriya ishi

4 laboratoriya ishi.
DNK ajratish uchun namunalar yig’ish, eritmalar va asboblarni tayyorlash. Turli metodlar yordamida o’simlik to’qimalaridan genom DNK ajratish.
Ishdan maqsad: Genom DNK ajratish uchun eritmalar tayyorlash va uni ajratishni o’rganish.
Ishni bajarish tartibi:

1. 
   DNK ajratish uchun namunalar yig’ish. Buning uchun turli g’o’za liniyalarining barglaridan olib, qog’oz qutichalarga solamiz. (14-rasm)
   

14-rasm. DNK ajratish uchun yig’ilgan namunalar
II. Eritmalar va asboblarni tayyorlash
DNK ajratish uchun buferlar
1) 2x lik CTAB tayyorlash(2-rasm)
100 mM Tris pH-8.0
20 mM EDTA pH-8.0
1.4 M NaCl
2 % CTAV
Avtoklav
2)10xCTAB tayyorlash(2-rasm)
0.7 M NaCl
10 % CTAV
Avtoklav
3) Xloroform:izoamil tayyorlash (24:1)
Xloroform
Izoamil spirti
4) CTAB precipitation tayyorlash (15-rasm)

50. 
    mM Tris pH-8.0
    

10 mM EDTA pH-8.0
1 % CTAV
Avtoklav

15-rasm. Turli CTAB lar
5) High salt TE tayyorlash
10 mM Tris pH-8.0
0.1 mM EDTA pH-8.0
1 M NaCl
Avtoklav
6) RNA ase
1 ml dis.H₂O ga 10 mg RNA ase qo’shib 10 daqiqa 100⁰ S suvda qaynatiladi. 20⁰ S da saqlanadi.
7) TE buffer tayyorlash
10 mM Tris pH-8.0

1. 
   mM EDTA pH-8.0
   

III. CTAB metodi yordamida o’simlik to’qimalaridan genom DNK ajratish
Kerakli asbob va uskunalar:
-xovoncha yoki probirka(1500-2000 mkl) va stikchalar
-paCTABka (96 talik)
-sentrifuga
-muzlatgich
-65 ⁰S avtoblot va vorteks
-kontsentrator
-rezina qo’lqop konchiklar (100,200 va 1000 mkl)