Reja : I. Molekulyar klonlash usuli haqida Genlarni klonlashda qo'llanilishi 3

REJA :
I. 1. Molekulyar klonlash usuli haqida

2. Genlarni klonlashda qo'llanilishi

3. Rekombinant DNKni qurish

II. XULOSA

Foydalanilgan adabiyotlar va saytlar
Molekulyar klonlash bakterial yoki sutemizuvchilar hujayralarida ekspressiya qilish uchun DNKga asoslangan eksperimental vositalarni yaratishning muhim usuli hisoblanadi . Bunday DNK konstruksiyalariga misol qilib, hamma joyda tarqalgan promouter nazorati ostida reportyor gen yoki cDNK ketma-ketligi bilan birlashtirilgan promotor element kiradi. Molekulyar klonlash vektor va insert DNKlarini tayyorlash, vektorga qo'shimchani bog'lash, vakolatliE. colini o'zgartirish va ijobiy klonlarni aniqlashni o'z ichiga oladi

Toʻliq oʻlchamdagi rasmni yuklab olish uchun tizimga kiring

An'anaga ko'ra, molekulyar klonlash ma'lum bir DNK fragmentini izolyatsiya qilish va kuchaytirish sifatida belgilanadi. Ushbu bo'laklarning aksariyati mavjud bo'lgan DNK qismini cheklash fermentlari bilan hazm qilish yoki uni PCR orqali nishonlash orqali yaratilgan. Qisqa qo'shimchalar ~ 100 shuningdek, bir-birini to'ldiruvchi bir ipli oligos sifatida tijorat sifatida sintezlanishi mumkin, ular keyinchalik ikki ipli bo'lak hosil qilish uchun tavlanadi.
Muvaffaqiyatli izolyatsiyadan so'ng, qiziqtirgan DNK vektor plazmidiga , E. coli da ko'paytirilishi mumkin bo'lgan ikki zanjirli dumaloq DNK bo'lagiga bog'lanadi . Laboratoriyada ishlatiladigan vektorlar tabiiy ravishda paydo bo'lgan plazmidlarning kichikroq versiyasini ifodalaydi, ular bir nechta asosiy xususiyatlarni o'z ichiga oladi: replikatsiya kelib chiqishi , dori-darmonga chidamlilik geni va DNK bo'laklarini kiritishni osonlashtiradigan noyob cheklash joylari. Ko'pincha bir nechta turli cheklash joylari "polilinker mintaqalar" yoki "bir nechta klonlash joylari" deb ataladigan joylarda birlashtirilgan bo'lib, turli qo'shimchalar uchun qulay va noyob cheklash fermenti birikmalarini tanlashni osonlashtiradi.
Klonlash strategiyasini ishlab chiqishda cheklovchi fermentlarni tanlash juda muhimdir. Ba'zilar qo'sh zanjirli DNKni bir joyda uzib, "to'mtoq" uchlarini hosil qilsalar, boshqalari kesilgan joyda bir nechta asoslardan iborat bo'shliqni qoldiradilar. Ushbu qo'shimcha "yopishqoq" uchlar bir-birini osongina topib, bog'lanish reaktsiyasining samaradorligini oshiradi va shu bilan muvaffaqiyatli klonlash hodisasi uchun imkoniyatni oshiradi. Cheklovchi fermentlarning o'ylangan kombinatsiyasi ko'plab ilovalar uchun juda muhim bo'lgan qo'shimchaning yo'nalishini boshqarishga yordam beradi.

Genlarni klonlashning qo'llanilishi

Genlarni klonlash in vitroda genlar yoki oligonükleotidlarning yangi birikmalarini o'z ichiga olgan yangi DNK molekulalarini ishlab chiqarishni va bunday rekombinant DNK molekulalarini bakteriyalarning replikativ mexanizmlarini ( 18.3-bo'lim ) va boshqa organizmlarning in vivo jonli ekspluatatsiyasi orqali ko'paytirishni o'z ichiga oladi. Gen injeneriyasi texnikasining rivojlanishi mikroorganizmlar genomini oʻzgartirishga imkon berdi, shuning uchun u oʻziga xos qiymati kam boʻlgan, ammo insoniyat uchun katta tibbiy yoki iqtisodiy ahamiyatga ega boʻlgan moddalarni hosil qiladi.
Foydali oqsillarni ishlab chiqarishni ta'minlash uchun E. coli DNKsiga begona genlar joylashtirildi . Ushbu usullar bilan interferonlar deb ataladigan antiviral oqsillar oilasi a'zolari ishlab chiqarilgan va ularning ayrim saraton kasalliklarini davolashda samaradorligini aniqlash uchun klinik sinovlar o'tkazilgan. Insulin, somatostatin kabi inson gormonlariE. coli va somatotropinInsulin qondagi glyukoza darajasini nazorat qiladi va uning etishmasligi turli xil jiddiy diabetik kasalliklarga olib kelishi mumkin. Cho'chqa va sigir oshqozon osti bezi insulin ishlab chiqarish bilan bog'liq muammolarni bartaraf etish, insulinga bo'lgan talabning ortishi va hayvon oqsilini doimiy ravishda in'ektsiya qilish orqali bemorning immunologik sezgirligi bilan bog'liq muammolarni bartaraf etish uchun inson insulini tijorat miqyosida sun'iy genlardan muvaffaqiyatli sintez qilindi. E. coli da sintez qilingan birinchi inson polipeptid gormoni14 aminokislota qoldiqlarini o'z ichiga olgan somatostatin bo'lib, insulin ishlab chiqarish texnikasini ishlab chiqish uchun ishlatilgan. Somatostatin haddan tashqari o'sish bilan tavsiflangan ko'plab kasalliklarni davolashda qo'llaniladi. Somatostatinga antagonistik gormon somatotropin (inson o'sish gormoni) bo'lib, mittilikni davolashda qo'llaniladi.
Genni klonlash potentsial yuqori tozalikdagi ifloslantiruvchi moddalarsiz qon mahsulotlarini ta'minlashi mumkin. Ba'zi gemofiliya bilan og'rigan bemorlarda koagulyatsion omil VIII omil talab qilinadi. Virus tashuvchilardan qonning qasddan to'planishi tufayli gepatit va orttirilgan immunitet tanqisligi sindromi (OITS) xavfi ushbu omilni DNK rekombinant usullari bilan ishlab chiqarish uchun nomzod sifatida aniqladi .
Qishloq xo'jaligida bakterial infektsiya orqali bir o'simlikning xususiyatlarini boshqasiga o'tkazishga imkon beradigan texnikalar ishlab chiqilgan. Bunday usullar kerakli xususiyatlarga ega o'simliklarning yangi navlarini yaratishi mumkin, masalan, infektsiyaga chidamlilik, noqulay ob-havo sharoitlariga bardosh berish qobiliyati yoki azotni biriktirish qobiliyati .
Protein bo'lmagan mahsulotlarni rekombinant usullar bilan sintez qilish mumkin. Ko'plab muhim farmatsevtika preparatlari kichik molekulalar bo'lib, ularning biosintezi turli fermentlarning ketma-ket ishtirokini talab qiladi. Barcha tegishli genlarni bitta plazmidga klonlash) moddalarni ishlab chiqarishni yaxshilash imkonini beradi. Streptomycesda shunday usullar bilan antibiotik aktinorhodin sintez qilingan . Ayrim virusli kasalliklarga qarshi eksperimental vaktsinalar ham rekombinant DNK texnologiyasi yordamida ishlab chiqarilgan.
Genlarni klonlash fundamental biologik tadqiqotlarda muhim rol o'ynadi. Uning ahamiyati ma'lum bir genni o'z ichiga olgan DNK bo'laklarini tayyorlashda yotadi va bu genning tuzilishi, funktsiyasi, ifodasi va faoliyatini nazorat qilish to'g'risidagi bilimlardagi yutuqlarga olib keldi. ni o'rganishda rekombinant DNK texnikasi qo'llanilganmetabolizmni tartibga solish. Metabolik tartibga solishda sitrat sintazasining o'rni in vitro tadqiqotlari natijasida olingan ma'lumotlarni sharhlash natijasida yuzaga keldi . Biroq, E. coli sitrat sintaza genini klonlash orqali sitrat sintazasining hujayra ichidagi darajasini uning genining tartibga soluvchi birligi ( 17.8 -bo'lim) orqali metabolizatsiya qilinmaydigan induktor, izopropil b - D -tiogalaktopiranozid orqali boshqarish mumkin. metabolik oqim tezligini hisoblash .
Har qanday metabolik yo'lning tartibga solinishini to'liq tushunish uchun tartibga soluvchi fermentlarning xususiyatlarini hal qilish kerak ( 10.6-bo'lim ). Klonlangan genlarning manipulyatsiyasi ularni tozalash uchun muhim miqdorda fermentlarni taqdim etdi . Ularning tuzilishini/tashkilligini keyingi tadqiq qilish, shu jumladan, ularning asosiy tuzilmalarini , struktura-funksiya munosabatlarini aniqlash va multigen oilalarining roli va ifodasini tahlil qilish , masalan, protein kinaz C bilan bog'liq genlar, metabolizmni tartibga solish haqidagi bilimimizni kengaytirdi. Darhaqiqat, gen texnologiyasi turli xil biologik izlanishlarda juda katta foyda va'da qiladi.