Закон Бугера Ламберта Бера Спектроскопические методы исследования фотобиологические процессы и их классификация

Спектр поглощения коровьего родопсина в УФ и видимой областях.

• Очищенный родопсин был измерен дважды: сначала он был выделен из адаптированной к темноте коровьей сетчатки (сплошная кривая) и затем снова выделен из сетчатки после ее освещения (пунктирная кривая). (From M.L. Applebury, DM. Zuckerman, A.A. Lamola, and T.M. Jovin, 1974, Biochemistry 13 : 3448. Copyright by the American Chemical Society

• Спектры поглощения некоторых хромофорных белков

• Зеленый хлорофилл

• Оранжевый  каротин

• Красный оксигемоглобин

• Спектры поглощения цитохрома с (Fe3+) при различных значениях рН 1.7 – 6.8

• Дифференциальный спектр – разностный спектр, который получается при автоматическом вычитании из спектра поглощения вещества в измеряемой кювете спектра поглощения вещества в кювете сравнения.

• Спектр в кювете сравнения

• Спектр в измеряемой кювете

• Дифференциальный спектр:

• Если разложить это в степенной ряд по малому параметру и пренебречь членами второго порядка малости, тогда дифференциальный спектр будет

• В первом приближении дифференциальный спектр
• поглощения соответствует первой производной
• от спектра поглощения

• СПЕКТР ПОГЛОЩЕНИЯ ТРИПТОФАНА В ВОДЕ
• МАКСИМУМ ПРИ 280 нм И МАЛЕНЬКИЙ ПИК ПРИ 288 нм

• СПЕКТР ПОГЛОЩЕНИЯ (а) и ТЕМПЕРАТУРНО-ПЕРТУРБАЦИОННЫЙ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЙ СПЕКТР (б) ТРИПТОФАНА В ВОДЕ
• Градиент температуры 10о, D – дифференциальная оптическая плотность

• Для получения ТЕМПЕРАТУРНО-ПЕРТУРБАЦИОННЫХ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫХ СПЕКТРОВ раствор белка одинаковой концентрации помещают в кюветы, в которых создают разность температур.
• ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЙ СПЕКТР ИМЕЕТ НЕСКОЛЬКО УЗКИХ МАКСИМУМОВ
• СПЕКТРЫ ПОГЛОЩЕНИЯ БЕЛКОВ МАЛО ОТЛИЧАЮТСЯ ДРУГ ОТ ДРУГА, ТОГДА КАК ТЕМПЕРАТУРНО-ПЕРТУРБАЦИОННЫЕ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЕ СПЕКТРЫ СУЩЕСТВЕННО РАЗЛИЧНЫ

• Методы АБСОРБЦИОННОЙ и ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ широко используются для определения и изучения
• констант скорости ассоциации субъединиц в белках
• конформационных изменений в белках
• процессов денатурации и ренатурации белков