СРАВНЕНИЕ СВОЙСТВ ДВУХ КЛЕТОЧНЫХ
КУЛЬТУР ЭНДОТЕЛИЯ EA.HY926 И HUVEC
Столбовая А.Ю., н.с., асп.
Российский научный центр радиологии и хирургических
технологий имени академика А. М. Гранова,
Национальный медицинский исследовательский центр
им. В.А. Алмазова,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Самойлович М.П., д.б.н., проф.
Первичная культура клеток эндотелия пупочной вены HUVEC
широко используется в исследованиях как
in vitro
модель для
изучения ангиогенеза, физиологических и патологических процес-
сов, происходящих в сосудах. Однако, продолжительность куль-
тивирования клеток HUVEC ограничена 10 пассажами, при этом
клетки, полученные от разных доноров, различаются между собой.
Клетки эндотелия EA.hy926, полученные в результате слияния кле-
ток HUVEC и клеток карциномы легкого A549, обладают признака-
ми эндотелия и представляют собой постоянную клеточную линию.
В процессе длительного культивирования клеточная линия может
также претерпевать изменения.
Цель
— сравнение клеток EA.hy926 и HUVEC по фенотипиче-
ских характеристикам и активности генов, связанных с эндотели-
альной дифференцировкой. Клетки EA.hy926 культивировали в сре-
де DMEM/F12, содержащей 5% эмбриональной телячьей сыворотки,
аминоптерин, тимидин и гипоксантин. Клетки HUVEC, полученные
от 4-х разных доноров, культивировали в среде для первичных куль-
тур эндотелия (ScienCell, США).
Высокий уровень экспрессии гена фактора фон Виллебранда
(VWF), характерного для дифференцированных клеток эндотелия,
обнаружен в клетках HUVEC, тогда как в клетках EA.hy926 уровень
активности гена VWF был значительно более низким. Уровень экс-
прессии рецепторов VEGFR1 и VEGFR2, принимающих участие в
ангиогенезе, также оказался выше в клетках HUVEC, чем в клет-
ках EA.hy926. Активность генов ростовых факторов (VEGF, TGFβ1,
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ПАТОФИЗИОЛОГИЯ
621
FGF2(b)), гена ENG и MMP-14 была одинаковой в клетках HUVEC
и EA.hy926.
Клетки HUVEC и EA.hy926 обладают одинаковым набором ад-
гезионных маркеров по результатам анализа методом проточной
цитометрии. Плотность адгезионных молекул CD31, CD105, CD144,
CD146, CD49e, оказывается выше на мембране клеток HUVEC, чем
на клетках EA.hy926. Большинство клеток HUVEC в популяции не-
сут на мембране индуцибельную молекулу CD54, тогда как только
на 10% клеток EA.hy926 обнаружен этот маркер.
Наряду с тем, что клетки EA.hy926 и HUVEC обладали общими
характерными для эндотелия свойствами, были выявлены различия
между ними, которые проявлялись в активности некоторых генов
эндотелиальной дифференцировки и в уровне экспрессии адгезион-
ных молекул.
622
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ПАТОФИЗИОЛОГИЯ
Do'stlaringiz bilan baham: |