Xxiv международная медико-биологическая конференция молодых исследователей Фундаментальная наука и клиническая

ОЦЕНКА ИНТЕРНАЛИЗАЦИИ СИНТЕТИЧЕСКИХ 
АНАЛОГОВ ПРОЛИН-БОГАТЫХ ПЕПТИДОВ, 
МЕЧЕННЫХ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ КРАСИТЕЛЕМ, 
В ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ 
IN VITRO
Довбыш О.В., студ., Андреева Е.А., асп., 
Филатенкова Т.А., н.с., Комлев А.С., м.н.с. 
Институт экспериментальной медицины,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Шамова О.В., д.б.н., доц.
Повышение эффективности противораковой химиотерапии яв-
ляется одной из актуальных задач современной биологии и меди-
цины. Решением этой проблемы может быть создание средств тар-
гетной доставки лекарственных препаратов в опухолевые клетки на 
основе природных пролин-богатых пептидов врожденного иммуни-
тета, которые способны самостоятельно и в конъюгате с каким-либо 
«грузом» проникать через мембраны клеток, не оказывая цитотокси-
ческого действия.
Целью
работы является исследование интернализации структур-
ных аналогов бактенецинов домашней козы Capra hircus в опухоле-
вые клетки 
in vitro
. В качестве объектов исследования использова-
лись химически синтезированные пептиды — различные аналоги 
бактенецинов — ChBac3.4-1, ChBac3.4-2, miniChBac7.5а, ChBac5-1.
Для возможности визуализации проникновения пептидов во 
внутриклеточное пространство, молекулы были помечены флуо-
ресцентным красителем BODIPY FL (Thermo Fisher Scientific, USA). 
Очистка конъюгатов осуществлялась методом обращенно-фазовой 
высокоэффективной жидкостной хроматографии на установке Gold 
System (Beckman Coulter, USA). С помощью электрофореза в кис-
лой буферной среде в присутствии мочевины была оценена степень 
чистоты конъюгата и показана его отличная от исходных пептидов 
подвижность. Масс-спектрометрический анализ показал совпадение 
расчетных и экспериментальных молекулярных масс, а также была 
подтверждена чистота полученных конъюгатов.

---

570
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ПАТОФИЗИОЛОГИЯ
Качественная оценка интернализации пептидов в опухолевые 
клетки линии K-562 осуществлялась с помощью флуоресцентного 
микроскопа EVOS FLoid (Thermo Fisher Scientific, USA). Установлено, 
что меченые пептиды в концентрациях 0,2 мкМ и выше при совмест-
ном инкубировании с клетками более 15 минут при 37°C накаплива-
ются в цитозоле, не оказывая при этом цитотоксического действия.
В качестве маркера клеточной гибели использовался иодид пропи-
дия.
Количественная оценка интернализации пептидов в опухолевые 
клетки осуществлялась методом проточной цитометрии на установ-
ке Navios (Beckman Coulter, USA). Было обнаружено, что при тех же 
условиях меченые пептиды проникают в мишени, при этом жизне-
способность клеток не опускалась ниже 94%.
Полученные данные подтверждают предположение о возможно-
сти использования исследуемых пептидов как основы для создания 
средств таргетной доставки лекарственных препаратов в малигнизи-
рованные клетки. На следующем этапе работы будут получены до-
полнительные данные о распределении меченых пептидов в опухоле-
вых клетках 
in vitro
методом конфокальной микроскопии.

---

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ПАТОФИЗИОЛОГИЯ
571