Xxiv международная медико-биологическая конференция молодых исследователей Фундаментальная наука и клиническая

ПРИМЕНЕНИЕ «SELF PROBING PRIMER» 
ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ 
ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ СОДЕРЖАНИЯ 
(НЕ)РЕДАКТИРОВАННЫХ МРНК: ПРИМЕР (R607Q) 
РЕДАКТИРОВАНИЯ GLUA2 СУБЪЕДИНИЦЫ 
AMPA- РЕЦЕПТОРА ГЛУТАМАТА
Шварц А.П., н.с.
Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова,
Санкт-Петербург, Россия
Научный руководитель: Зайцев А.В., д.б.н. 
Редактирование мРНК является распространённым регулятор-
ным механизмом, изменяющим кодируемую аминокислотную по-
следовательность, процесс сплайсинга, стабильность мРНК [2]. Так, 
в случае рецептора GluA2 субъединицы АМПА рецептора глутамата 
редактирование мРНК резко меняет его биофизические свойства.
Количественная оценка РНК-редактирования проводится с по-
мощью ПЦР помощью трудозатратных методов на основе ПЦР
в конечной точке, что 
a priori
обладает низким количественным раз-
решением.
Перспективным было бы определение количества (не)редактиро-
ванных форм с помощью ПЦР в реальном времени.
Целью настоящей работы
была адаптация метода Self-probing 
primer PCR для количественного определения уровня (не)редакти-
рованной по сайту (R607Q)мРНК GluA2 рецептора глутамата. 
Были подобраны специфические системы праймеров для опре-
деления содержания (R607Q)-редактированной и нередактирован-
ной форм мРНК GluA2 рецептора глутамата в образцах лаборатор-
ных крыс на основе технологии Self probing primers [3], при которой 
прямой и обратный праймеры метятся гасителем флюоресценции 
и флюорофором без использования дополнительного зонда. Были 
подобраны оптимальные концентрации праймеров, системы дают 
единичные специфичные ПЦР-продукты и демонстрируют высокую 
эффективность (90-95%). С помощью полученных систем удалось 
обнаружить (R607Q)-нередактированную в мозге взрослых крыс, 

---

ФИЗИОЛОГИЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА
803
хотя классическими методами она раньше обнаруживалась только
в эмбриональном мозге и сразу после рождения [1].
Таким образом, количественное определение редактирования 
РНК может успешно проводиться с помощью ПЦР в реальном 
времени на основе простой технологии Self probing-праймеров.
С помощью этой технологии впервые удалось обнаружить нередак-
тированную по сайту (R607Q) мРНК GluA2-субъединицы в мозге 
взрослых крыс.
Поддержано грантом РФФИ № 18-315-20043.

---

804
ФИЗИОЛОГИЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА