Влияние температуры и рН на активность ферментов

Тема: Влияние температуры и рН на активность ферментов.


Опыт №1. Влияние температуры на активность ферментов
Необходимый биоматериал: слюна.
Необходимое оборудование: штатив, пробирки, стакан со льдом, водяная баня или термостат, пипетки,
Необходимые реактивы: 1 % раствор крахмала, 10-кратно разведенный раствор слюны, 0,1 % раствор йода.
Помимо концентрации фермента и субстрата, основными факторами, влияющими на активность ферментов, являются также участники ферментативной реакции, температура, концентрация ионов водорода, активность и парализаторы. Механизм действия этих факторов на каталитическую активность фермента зависит от образования активного центра фермента, создания условий для комплексообразования субстрата с ферментом, что является основным условием ферментативной реакции.
Как и в любой каталитической реакции, скорость ферментативной реакции увеличивается с повышением температуры. Однако, в отличие от неорганических катализаторов, ферменты повышают свою активность до 40-45°С, от 50-60°С их активность резко снижается, а при достижении 70-75°С фермент денатурирует и полностью перестает работать.
Ход работы: Взять 4 пробирки и налить в каждую из них по 10 капель 1% раствора крахмала, первую пробирку в стакан со льдом, вторую - при комнатной температуре, третью - на водяной бане при 45°С, четвертую - на водяной бане. или термостате при 75°С, через 5 минут после прохождения ко всем растворам добавить по 10 капель слюны, разбавленной в 10 раз в том же положении стоя, и оставить еще на 5 минут в исходном состоянии. По истечении этого срока в отдельные пробирки отбирают по 1-2 капли смеси в пробирках, сверху добавляют по 1 капле 0,1% раствора йода. Если все жидкости в пробирках окрасятся в синий цвет, инкубацию откладывают еще на 5 мин и повторяют реакцию с йодом. При йодировании крахмал образует синюю окраску, с амилодекстрином (моль.г'. = 10000 Да) становится сине-фиолетовой, с эритродекстрином - темно-красной (моль.ог'. = 4000-6000 Да), почти не окрашивается ахродестрином ( около 3700 Да) и не окрашивается с мальтодекстрином (1000 Да). Максимальная скорость ферментативной реакции достигается при 45°С. Самый медленный или наиболее медленный гидролиз наблюдается в растворах 1 и 4, т. е. при 0° и 75°С. Результаты опыта заносят в таблицу (таблицу).
стол