Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

1
 • а / Е
2
, где Е
1
— оптическая плотность сыворотки крови, Е
2
— 
оптическая плотность стандартного раствора фруктозы, а — количество 
фруктозы в пробе стандартного раствора (в мкг). 
Работа 26. Определение глюкозы энзиматическим методом 
Метод основан на каталитическом действии глюкозооксидазы, ускоряю-
щей окисление глюкозы кислородом воздуха до глюконовой кислоты: 
С
6
Н
12
O
6
+ О
2
+ Н
2
О 
глюкозооксидаза
С
6
Н
12
O
7
+ Н
2
O
2 
Образующийся в эквимолярном количестве пероксид водорода под дейст­ 
вием пероксидазы разлагается, а выделившийся атомарный кислород окисля­ 
ет добавленный к реакционной смеси хромогенный кислородный акцептор (о-
толидин). Количественное определение глюкозы сводится к измерению 
оптической плотности образовавшегося в опыте, окрашенного в синий цвет 
соединения. 
Этот метод предназначен для специфического определения содержания 
глюкозы в биологических жидкостях после удаления белков в присутствии 
других­ сахаров и редуцирующих веществ неуглеводной природы. 
Реактивы и оборудование: 
Сульфат цинка (5 %); гидроксид натрия (0,3
н.); хлорид натрия (0,9 %); о-
толидин (1 %, перекристаллизованный в абсолютном этаноле); ацетат-ный 
буфер (0,25
н., pH 4,8): 4 части уксусной кислоты (0,25 н.) смешивают с 6 
частями­ ацетата натрия (0,25
н.); стандартный раствор глюкозы (50, 100, 200 
мкг / мл), приготовленный на насыщенном водном растворе бензойной кислоты; 
рабочий реактив: к 70–80 мл 0,25 
н. ацетатного буфера (pH 4,8) до-бавляют 2 мг 
препарата глюкозооксидазы и 1 мг сухой криcmaллuческой пе-роксидазы. Смесь 
перемешивают, приливают 1 мл 1 % раствора о-толидина и доводят объем до 
100 мл ацетатным буфером. Реактив готовят за 1–2 часа 
126 

---

до употребления. Рабочий реактив можно хранить в темной склянке с при-
тертой пробкой в холодильнике­ в течение 1,5–2 месяцев. Фотоэлектроколо-
риметр, центрифуга, секундомер­, пипетки, градуированные на 1 и 5 мл, про-
бирки химические и центри­фужные.