6.8.
Методы денитрации
После минерализации биологического материала любым из
перечисленных методов минерализат содержит окислители, которые
мешают дальнейшему проведению исследования. Жидкость,
полученная после минерализации с помощью H
2
SO
4
и HNO
3
, как
правило, содержит оксиды азота, азотную, азотистую, серную кислоты
и нитрозилсульфат. Если каплю холодного минерализата смешать с
раствором дифениламина в серной кислоте, образуется синее
окрашивание, указывающее на наличие окислителя в минерализате.
Для удаления оксидов азота из минерализата применяется 2 способа:
1
.Термический
(гидролизный)
способ
:
минерализат
в
фарфоровой чашке разбавляют в 5–10 раз дистиллированной водой и
упаривают его до появления на поверхности жидкости тяжелых белых
паров триоксида серы. Жидкость проверяют с раствором
дифениламина, если есть посинение, первоначальную операцию
повторяют снова, т.е. пока дифениламин не покажет, что оксиды азота
133
Глава 6. Вещества, изолируемые методом минерализации
_______________________________________________________
полностью не удалены из минерализата. Удаление оксидов азота из
минерализата термическим способом требует затраты нескольких часов
(15–
17), т.к. в минерализате, в результате взаимодействия оксидов
азота с H
2
SO
4
, образуется нитрозилсульфат (нитрозилсерная кислота),
устойчивая к термическим воздействиям.
4HNO
3
→
4NO
2
+ O
2
+ 2H
2
O (6.8)
2NO
2
+ H
2
SO
4
→
HSO
4
NO +HNO
3
(6.9)
Нитрозилсерная кислота способна гидролизоваться с
образованием серной и азотистой кислот. С повышением температуры
степень гидролиза нитрозилсерной кислоты увеличивается. Если в
процессе гидролиза удалять азотистую кислоту, то степень гидролиза
нитрозилсульфата также увеличивается.
HSO
4
NO + H
2
O HNO
2
+ H
2
SO
4
(6.10)
Большая часть оксидов азота при гидролизном методе
удаляется в первый час денитрации, остальная часть удаляется
медленно, то есть удаление азотистой кислоты в виде оксидов по этому
способу идет медленно.
2.
Денитрация с применением восстановителей.
При дальнейших исследованиях по совершенствованию методов
денитрации было установлено, что для этой цели можно использовать
восстановители (формальдегид, мочевину, сульфит натрия).
Денитрация с помощью этих веществ основана на гидролизе
нитрозилсерной кислоты и восстановлении азотистой кислоты
(продукта гидролиза нитрозилсерной кислоты) до легко удаляемых из
жидкостей оксида азота (NO) и элементарного азота (N
2
).
Денитрация минерализата с применением формальдегида.
К минерализату прибавляют 10–15 мл дистиллированной воды и
смесь нагревают. В нагретую жидкость, осторожно, по каплям, избегая
избытка, вносят формалин. Наблюдается бурное выделение пузырьков
газа (NO и N
2
) и, вследствие окисления NO кислородом воздуха,
выделяются бурые пары NO
2
. Удобство применения формальдегида в
том, что он, как восстановитель, взаимодействует и с HNO
2
,
полученной при гидролизе нитрозилсерной кислоты, и с HNO
3
,
содержащейся в минерализате в избытке.
4HNO
3
+ 3CH
2
O → 3CO
2
+ 4NO + 5H
2
O (6.11)
4HNO
2
+ 2CH
2
O → 2NO + N
2
+ 2CO
2
+ 4 H
2
O (6.12)
2NO + 2O
2
→ 2NO
2
(6.13)
134
Do'stlaringiz bilan baham: |