Учебная литература медицинских вузов для студентов

Глава 17
ВОЗБУДИТЕЛИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ТРАНСМИССИВНЫХ ИНФЕКЦИЙ

К возбудителям бактериальных трансмиссивных инфекций относятся бактерии, которые передаются людям при участии пере­носчиков — кровососущих членистоногих: комаров, москитов, клещей, вшей и др. (табл. 17.1). При этом членистоногие являются промежуточными или основными природными хозяевами возбу-

Возбуди- Заболевание Источник Перенос- Способ тель инфекции чик паразитизма Borrelia Эпидемичес- Человек Вошь Факультати-recurrentis кий возврат- платяная вные внут-ный тиф риклеточ-Borrelia Эндемический Разные виды Клещи ные пара-caucasica возвратный грызунов орнито- зиты и др. тиф доровые Borrelia Болезнь Лайма Дикие грызу- Клещи burgdorferi (клещевой ны, иксодовые иксодо-Лайм-бор- клещи с транс- вые релиоз) овариальной передачей Rickettsia Эпидемичес- Человек Вошь Облигатные prowazekii кий сыпной платяная внутрикле-тиф и голов- точные па-ная разиты. Раз-R.typhi Эндемический Крысы, мыши Крыси- множаются сыпной тиф ные блохи ^в цитоплаз-и вши ме эндоте-R.tsutsuga- Лихорадка Грызуны, сум- Красно- ^лия ^СОСУД°^Вmushi Цугугамуши чатые, насеко- телковые моядные клещи (личинки) Группа клеще­вых пятнистых лихорадок: R.conori Марсельская Собачий клещ Собачий Облигатные лихорадка клещ внутрикле-R.sibirica Северо-азиат- Грызуны (по- Иксо- точные па-ский риккет- левые мыши, довые разиты. Раз-сиоз суслики и др.) клещи множаются R.acari Осповидный Домовая мышь, Гама- ^в Ц^итоплаз-риккетсиоз серые крысы зовые ^ме заражен-клещи ^ных ^клетокEhrlichia Эрлихиозы Многие виды Иксодо- Облигатные canis, диких живот- вые, гама- внутрикле-E.sennetsu, ных, клещи зовые, ар- точные па-E.phagocy- гасовые разиты tophila и клещи др.

Возбуди- Заболевание Источник Перенос- Способ тель инфекции чик паразитизма Coxiella Q-Лихорадка Многие виды Иксодо- Облигатные bumetii диких и до- вые, гама- внутрикле-машних жи- зовые, ар- точные па-вотных гасовые разиты клещи Bartonella Траншейная Человек (?) Платяная Факультати-quintana лихорадка вошь вные внут­риклеточные паразиты

нами из R.prowazekii и R.typhi. Сопоставить результаты и обосновать диагноз заболевания. 4. Учесть результаты РСК, поставленных для дифферен­циации первичного эпидемического сыпного тифа и рецидива (болезнь Брилля—Цинссера). Сделать за­ключение по результатам серодиагностики.
а Методические указания
• Микробиологическая диагностика возвратного тифа
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование. Основной метод лабора­торной диагностики возвратного тифа. У больного во время приступа болезни берут кровь и готовят препараты для микро­скопии. Мазки окрашивают фуксином, а препарат "толстая" капля — по методу Романовского—Гимзы. Borrelia recurrentis представляют собой тонкие изогнутые нити длиной 8—16 мкм с 4—12 завитками (рис. 17.1.1; на вклейке). В мазках они окрашиваются фуксином в красный цвет, в препарате "толс­тая" капля — в фиолетово-розовый. Кроме того, рекомендуется исследовать нативные препараты в темном поле.
Биопроба. Используют для дифференциальной диагностики эпидемического возвратного тифа от клещевого, к возбудите­лям которого чувствительны лабораторные животные. Кровью больных заражают морских свинок. Через 5—6 дней при поло­жительном результате (клещевой возвратный тиф) в крови животных появляется большое количество боррелий.
Серодиагностика имеет дополнительное значение, для выяв­ления антител применяют РСК, метод непрямой ИФ и другие реакции.
• Микробиологическая диагностика клещевого боррелиоза
Лайма
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптаты из пора­женных участков кожи, кровь, спинномозговая жидкость; ге­молимфа инфицированного клеща.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование. На ранних стадиях забо­левания в биоптатах из пораженных участков кожи возбудитель может быть обнаружен методом серебрения. По морфологии В. burgdorferi не отличается от других представителей рода.
Бактериологическое исследование. В.burgdorferi культивируют на жидких и плотных питательных средах сложного состава (среда Келли и др.). Для идентификации возбудителя исполь­зуют биохимические и молекулярно-генетические методы (гель-электрофорез для анализа белков наружной мембраны, ДНК-гибридизацию, рестрикционный анализ ДНК).
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Антигены возбудителя в био-птатах из пораженных участков кожи или гемолимфе инфици­рованного клеща могут быть обнаружены методом ИФ.
Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.
Серодиагностика. Для обнаружения антител в крови больно­го применяют методы непрямой ИФ и ИФА.
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, аспират из высыпных элементов.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскогшческое исследование. Для обнаружения рик-кетсий в организме переносчика, органах зараженных живот­ных и культурах клеток готовят препараты, окрашивают их по методам Романовского—Гимзы, Здродовского или другими ме­тодами и микроскопируют. R.prowazekii полиморфны. В зави­симости от стадии инфекции, вида культуры в цитоплазме зараженных клеток встречаются различные морфологические типы риккетсий. Использование иммунофлюоресцентного ме­тода (см. ниже) облегчает обнаружение риккетсий.
Бактериологическое исследование. Материалом для выделе­ния возбудителей при всех видах риккетсиозов служит кровь, взятая у больного в раннем периоде лихорадки (схема 17.1.1). Первичное выделение риккетсий осуществляется путем зара­жения лабораторных животных (мышей, морских свинок и др.). Выбор зависит от вида возбудителя, поскольку лаборатор­ные животные различаются по чувствительности к риккетсиям разных видов. Для дальнейшего культивирования первичного изолята используют культуры клеток или куриные эмбрионы. Культивирование риккетсий производится только в специаль­ных лабораториях, требует соблюдения определенных правил безопасности и практически применяется редко.
Биопроба. Применяют для дифференциации возбудителей эндемических риккетсиозов от R.prowazekii. Для этого самцу морской свинки внутрибрюшинно вводят кровь больного. При большинстве эндемических риккетсиозов у животных развива­ется специфический периорхит, сопровождающийся накопле­нием риккетсий в мезотелии влагалищных оболочек яичка (положительный скротальный феномен).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Возбудитель может быть обна­ружен в аспирате из высыпных элементов, а также в цитоплаз­ме моноцитов периферической крови методом иммунофлюо-ресценции. Положительные результаты удается получить в 50 % случаев заболевания.

Биохимические и молекулярно-биологичес­кие исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбу­дителя с помощью метода "зондов" и ПЦР. В случае обнару­жения соответствующих молекул можно поставить предвари­тельный диагноз.
Серодиагностика. Является наиболее распространенным и доступным методом лабораторной диагностики риккетсиозов. Для обнаружения антител в крови больного применяют реак­ции агглютинации, РКС и РИГА, непрямой иммунофлюоре-сценции, ИФА и др. (см. схему 17.1.1, тему 10.4).
Реакция агглютинации применяется при серодиагностике всех риккетсиозов и характеризуется высокой специфичнос­тью. В отличие от РСК РИГА не позволяет провести внутри-групповую дифференциацию риккетсиозов. Однако РИГА мо­жет быть использована для определения фазы заболевания, поскольку гемагглютинирующие антитела накапливаются в вы­соком титре в ходе инфекционного процесса, титр их быстро падает в период реконвалесценции, а через 6 мес после выздо­ровления они исчезают. Использование РСК в сочетании с РИГА позволяет дифференцировать текущее заболевание от перенесенного в прошлом (анамнестического).
Серодиагностика позволяет дифференцировать первичный (эпидемический) сыпной тиф от рецидива сыпного тифа (бо­лезни Брилля—Цинссера) на основании особенностей иммун­ного ответа. При первичной инфекции образуются антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М, тогда как при рецидиве антитела представлены преимущественно иммуно­глобулинами класса G. Метод ИФА позволяет избирательно выявлять противомикробные IgM или IgG в сыворотке боль­ных.
• Микробиологическая диагностика эрлихиозов МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Цитологическое исследование. В лейкоцитах периферичес­кой крови больных при окраске по методу Романовского— Гимзы могут быть обнаружены характерные гроздьевидные включения — морулы, напоминающие ягоды ежевики.
Бактериологическое исследование. Эрлихии культивируют путем заражения клеточных культур (первичные культуры мо­ноцитов собак, перевиваемые линии мышиных макрофагов, клетки HeLa, промиелоцитарные опухолевые клетки человека и др.). В зараженных клетках появляются характерные вклю­чения, которые выявляют при окраске по методу Романовско­го— Гимзы. Для идентификации используют иммунохимичес-кие и молекулярно-биологические методы (ПЦР, метод ДНК-зондов). Метод культивирования эрлихий редко применяют с диагностической целью по причине трудоемкости.
Экспресс-методы диагностики. Биохимические и моле­кулярно-биологические исследования. ДНК возбуди­теля может быть обнаружена непосредственно в крови и лей­коцитах больного с помощью метода "зондов" и ПЦР.
Серодиагностика. Антитела к антигенам эрлихий в сыворот­ке крови пациентов могут быть обнаружены с помощью метода непрямой ИФ (диагностический титр 1:40) и других серологи­ческих реакций. Необходимо помнить, что антитела в диагнос­тических титрах могут длительно сохраняться после выздоров­ления, поэтому для подтверждения диагноза применяют метод парных сывороток.
• Микробиологическая диагностика бартонеллезов
(см. тему 16.1 "Микробиологическая диагностика инфек­ций, вызванных Bartonella hensella")
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, биоптаты по­раженных органов, лимфатических узлов.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое, бактериологическое исследование, экс­пресс-методы диагностики см. тему 16.1 "Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных Bartonella hensella".
Серодиагностика. Антитела к антигенам бартонелл в сыво­ротке крови пациентов могут быть обнаружены с помощью ИФА, метода непрямой ИФ и других серологических реакций. Необходимо помнить, что антитела могут присутствовать в крови практически здоровых лиц, поэтому для подтверждения диагноза применяют метод парных сывороток. Для обнаруже­ния IgM используют метод непрямой ИФ.
• Диагностические, профилактические и лечебные препараты
Тест-системы для диагностики возвратного тифа и болезни Лайма методом ДНК-зондов.
Флюоресцирующие антитела для диагностики возвратного тифа и болезни Лайма методом ИФ.
Тест-системы для серодиагностики возвратного тифа и бо­лезни Лайма методом непрямой ИФ.
Тест-системы для диагностики эрлихиозов методом ДНК-зондов.
Флюоресцирующие антитела для диагностики эрлихиозов ме­тодом ИФ.
Тест-системы для серодиагностики эрлихиозов методом ИФА.
Тест-системы для серодиагностики эрлихиозов методом не­прямой ИФ.
Антибиотики: пенициллины, тетрациклины, хлорамфеникол, фторхинолоны, макролиды и др.