1.6.4. O'lchamni istisno qilish xromatografiyasi. Hajmni istisno qilish xromatografiyasi suyuq xromatografiyaning bir turi bo'lib, unda tarkibiy qismlarni ajratish molekulalarning o'lchamlari bo'yicha sorbent teshiklaridagi erituvchi va uning zarralari orasidan oqadigan erituvchi o'rtasida taqsimlanishiga asoslangan. Ajratish jarayonida kichik molekulalar polimer tarmog'iga kiradi, uning teshiklarida erituvchi statsionar faza bo'lib xizmat qiladi va u erda saqlanadi. Katta molekulalar polimer tarmog'iga kira olmaydi va kolonnadan mobil faza bilan yuviladi. Avval eng katta molekulalar, so'ngra o'rta molekulalar va eng oxirida kichiklari elutsiya qilinadi.
Hajmni istisno qilish xromatografiyasi jel o'tkazuvchanligi va gel filtratsiyasiga bo'linadi. Jel o'tkazuvchanlik xromatografiyasida ajralish organik erituvchilarda shishib ketadigan polimerlarda sodir bo'ladi. Hajmini istisno qilish xromatografiyasining gel filtrlash versiyasi suvda shishiradigan polimerlardan statsionar fazalar sifatida foydalanishni o'z ichiga oladi.
Tahlil qilinayotgan namunaning tarkibiy qismlarini o'lchamni istisno qilish ustunida ushlab turish vaqti ularning molekulalarining o'lchamiga va sorbent teshiklariga tarqalishiga, shuningdek, statsionar faza g'ovaklarining o'lchamiga bog'liq.
Ushbu turdagi suyuqlik xromatografiyasida bo'linish koeffitsienti D Xromatografik ustunda eng past tezlikda harakatlanadigan, statsionar fazaning panjarasiga kirib boradigan tahlil qilinadigan namunaning eng kichik molekulalari uchun u 1 ga teng, chunki harakatlanuvchi faza va statsionar fazaning teshiklaridagi erituvchi bor. bir xil tarkib. Bunda ustun xromatografiyasining asosiy tenglamasi shaklni oladi
Statsionar fazaning g'ovaklariga kirmaydigan katta molekulalar kolonnadan ko'chma faza bilan birga elutsiya qilinadi. Ular uchun D= 0, a V R =V m. Tarqatish koeffitsienti qiymatlarining bunday diapazoni (0 dan 1 gacha) faqat o'lchamni istisno qilish xromatografiyasi uchun xosdir.
Tahlil qilinadigan ko'p komponentli moddaning barcha molekulalari kolonnadan kichik hajmdagi erituvchini o'tkazish orqali yuvilishi kerak. V m oldin V m +V s va ajratish erituvchi cho'qqisi chiqishidan oldin tugaydi. Shuning uchun xromatografiyaning bu turida katta bo'sh hajmga ega bo'lgan etarlicha uzun ustunlardan foydalanish kerak. V m va sorbentdagi ko'p miqdordagi teshiklar.
Xromatografik cho'qqilarning o'lchamini istisno qilishda ajratishni aralash erituvchilar bilan gradient elyusiyasi yordamida yaxshilash mumkin.
O'lchamni istisno qilish xromatografiyasida ishlatiladigan har bir sorbent ma'lum bir teshik hajmi bilan tavsiflanadi va shuning uchun ajratiladigan molekulyar og'irliklarning ma'lum bir maydoniga va ma'lum bir kalibrlash egri chizig'iga ega. Bunday holda, saqlanadigan hajmning molekulyar og'irlik yoki molekulalarning hajmiga bog'liqligini tavsiflovchi kalibrlash egri chizig'i, qoida tariqasida, murakkab shaklga ega.
O'lchamni istisno qilish xromatografiyasida statsionar fazalar maxsus tahliliy vazifalar asosida tanlanadi. Dastlab, tahlil qilish uchun qanday erituvchi tizimi (suvli yoki suv-organik) ishlatilishi mumkinligi aniqlanadi. Bunga qarab sorbent turi aniqlanadi. Agar suvda eruvchan namunalar ajratilishi kerak bo'lsa, masalan, suvda shishiradigan o'zaro bog'langan dekstranlar (Sephadex) yoki poliakrilamidlar (Biogel P) statsionar fazalar sifatida ishlatiladi. Organik erituvchilarda eriydigan moddalarni ajratish organik erituvchilarda (stirogel, poragel, biobid C) shishib ketadigan turli darajadagi o'zaro bog'langan polistirollarda amalga oshirilishi mumkin. Bunday shishgan jellar odatda bosim barqaror emas va juda past mobil fazali oqim tezligiga imkon beradi, bu esa tahlil vaqtini oshiradi. O'lchamni istisno qilish xromatografiyasining yuqori samarali versiyasini amalga oshirish uchun qattiq matritsali statsionar fazalarni - silikagellardan foydalanish kerak, ularning kamchiliklari - yuqori adsorbsion faollik - sirtni silanizatsiya qilish yoki tegishli qutbli elyuentni tanlash orqali yo'q qilinadi. .
O'lchamni istisno qilish xromatografiyasida mobil fazalar sifatida foydalanish mumkin bo'lgan moddalar:
tahlil qilinayotgan namunani to‘liq eritib yuborish;
sorbentni yaxshilab namlash;
sorbentga namuna komponentlarining adsorbsiyasiga qarshi turish;
past yopishqoqlik va toksiklikka ega.
