|
KANITATIV TAHLILI
Miqdoriy suyuqlik xromatografiyasi yaxshi ishlab chiqilgan analitik usul bo'lib, aniqligi bo'yicha miqdoriy gaz xromatografiyasidan kam bo'lmaydi va TLC yoki elektroforez aniqligidan sezilarli darajada oshadi.Afsuski, HPLCda turli xil kimyoviy tuzilishdagi birikmalar uchun xuddi shunday sezgirlikka ega bo'lgan detektor yo'q ( katarometr kabi Shuning uchun, miqdoriy natijalarni olish uchun asbobni kalibrlash talab qilinadi.
Miqdoriy tahlil quyidagi bosqichlardan iborat: 1) xromatografik ajratish; 2) tepalik joylari yoki balandliklarni o'lchash; 3) xromatografik ma'lumotlar asosida aralashmaning miqdoriy tarkibini hisoblash; 4) olingan natijalarni sharhlash, ya'ni statistik ishlov berish. Keling, ushbu bosqichlarning barchasini ko'rib chiqaylik.
4.1. XROMATOGRAFIK AYRISH
Namuna olish paytida xatolarga yo'l qo'yilishi mumkin. Ayniqsa, xatolikka yo'l qo'ymaslik va turli xil qattiq namunalar, o'ta uchuvchi yoki beqaror moddalar, qishloq xo'jaligi mahsulotlari va biomateriallarning tegishli namunasini olish juda muhimdir. Bir hil bo'lmagan namunalar, masalan, oziq-ovqat mahsulotlari, yaxshilab aralashtiriladi va chorak bo'linadi. Ushbu operatsiyani qayta-qayta bajarish namunaning bir xilligiga erishiladi.
Ekstraksiya, izolyatsiyalash, tozalash va boshqalar bosqichida moddalarning xatolari va yo'qotilishiga yo'l qo'yilishi mumkin.
Namunalar to'liq eritilishi va ularning eritmalari ±0,1% aniqlik bilan tayyorlanishi kerak. Namunani mobil fazada eritib yuborish maqsadga muvofiqdir, bu xromatografga kiritilgandan keyin uning cho'kishi ehtimolini istisno qiladi. Agar mobil fazada erishi mumkin bo'lmasa, u bilan aralashadigan erituvchidan foydalanish va namuna hajmini (25 mkl dan kam) xromatografga yuborish kerak.
Namuna quyish paytida fraksiyalanish, oqish va cho'qqiga surtish tufayli jiddiy xatolar yuzaga kelishi mumkin. Cho'qqilarni surtish dumlarning shakllanishiga olib keladi, bu cho'qqilarning qisman bir-biriga yopishishiga va natijada aniqlashda xatolarga olib keladi. Yuqori aniqlik va operatorga kamroq bog'liqlik tufayli namunani in'ektsiya qilish uchun shpritslarga qaraganda pastadirli valfli qurilmalar afzalroqdir.
Moddalarni xromatografik ajratishda ma'lumotlarning buzilishiga olib keladigan asoratlar ham paydo bo'lishi mumkin: miqdoriy tahlil. Xromatografik jarayon davomida namunaning mumkin bo'lgan parchalanishi yoki o'zgarishi yoki ushbu ustundagi moddaning qaytarilmas adsorbsiyasi. Ushbu kiruvchi hodisalar mavjud emasligini ta'minlash va agar kerak bo'lsa, ustunni qayta tiklash yoki uni almashtirish muhimdir. Xromatografiya shartlarini o'zgartirish orqali cho'qqilarning bir-birining ustiga chiqishi va qoldiqlari ham kamayishi mumkin.
Shakli noto'g'ri yoki noaniq bo'lgan cho'qqilar yoki chiqish vaqti yaqin bo'lgan cho'qqilar uchun, chunki yetarlicha segregatsiya bo'lmasligi mumkin. Odatda, qiymati d" > 0,5 bo'lgan cho'qqilar qo'llaniladi. Eng yuqori ustunli samaradorlikka 1 g sorbentga 10~5 -10~6 g erigan moddaning kiritilishi bilan erishiladi. Ko'p miqdorda namunalar kiritilganda, bog'liqlik. yuk ustidagi cho'qqi balandligi chiziqli bo'lmagan bo'lishi mumkin va cho'qqi maydoni uchun miqdoriy baholash talab qilinadi.
Aniqlash yoki kuchaytirish bilan bog'liq xatolar xromatografik ajratish natijalarining sezilarli darajada buzilishiga olib keladi. Har bir detektor o'ziga xoslik, chiziqlilik va sezgirlik bilan tavsiflanadi. Mikroifratlarni tahlil qilishda selektivlikni tekshirish ayniqsa muhimdir. UV detektorlarining javobi o'xshash funktsional guruhlarga ega bo'lgan moddalarga 104 marta o'zgarishi mumkin. Har bir tahlil qiluvchi modda uchun detektor javobini kalibrlash kerak. Tabiiyki, UV hududida so'rilmaydigan moddalar fotometr detektori sifatida foydalanilganda magnitafonga signal bermaydi. Refraktometrdan foydalanganda salbiy tepaliklar paydo bo'lishi mumkin. Bundan tashqari, bu detektor termostatlangan bo'lishi kerak, bu UV detektori uchun talab qilinmaydi.
Detektorning chiziqliligi AOK qilingan namunaning hajmini aniqlaydi. Shuni esda tutish kerakki, ustun orqali oqim tezligi, ustun va detektorning harorati va uning dizayni tahlilning aniqligiga ta'sir qiladi. Elektr signalini chiqish moslamasiga (magnitofonga), integratorga yoki kompyuterga uzatishdagi xatolar shovqinni qabul qilish, topraklama yo'qligi, tarmoqdagi kuchlanishning o'zgarishi va boshqalar tufayli yuzaga kelishi mumkin.
Do'stlaringiz bilan baham: |
