разделение фрагментов в агарозном геле;
перенос на нитроцеллюлозу;
блокирование «пустых» зон избытком ДНК;
обработка зондом и образование гибридов;
отмывка несвязавшегося зонда, ауторадиография и расшифровка результатов. Ес-
ли проявляется полоска, значит, произошло связывание специфического зонда с ДНК паци-
ента.
Такая диагностика наследственной патологии может проводиться и пренатально, в
качестве биологического материала в этом случае используют клетки амниотической жидко-
сти.
Принцип гибридизации с радиоактивным зондом лежит и в основе широко использу-
емого
метода "отпечатков пальцев ДНК"
. Каждый организм имеет свою неповторимую
последовательность нуклеотидов в ДНК с уникальным расположением сайтов для действия
рестриктаз. Поэтому после выделения ДНК и разрезания ее рестриктазами образуются фраг-
менты разной величины. Эти фрагменты разделяют методом электрофореза в агарозном геле
и проводят гибридизацию с пробами радиоактивной ДНК (обычно используют несколько
зондов). Каждый зонд специфически присоединяется только в одном или двух местах. Такая
разновидность метода получила название «анализ полиморфизма длины рестрикционных
фрагментов» (RFLP, restriction fragment length polymorphism). Конечная картина состоит из
ряда полосок, их расположение уникально и характерно только для одного человека. Одина-
ковые «отпечатки пальцев ДНК» могут иметь только однояйцевые близнецы.
Применение метода «отпечатков пальцев ДНК»:
1.
Для идентификации личности.
2.
В судебно-медицинской практике — неопровержимое доказательство принадлеж-
ности пятен крови, спермы, др. биологического материала.
3.
Комплексная диагностика ряда наследственных заболеваний, в том числе в гене-
тических консультациях для оценки вероятности рождения больного ребенка.
4.
Поиск участков в ДНК, ответственных за развитие па-
тологии (одновременное обследование больного и его род-
ственников позволяет обнаружить изменения в ДНК, ведущие
к развитию болезни.
5.
Установление отцовства. В приведенном на рисунке
примере — «отпечатки пальцев ДНК» матери (М), ребенка
(Р), и двух предполагаемых отцов (О
1
и О
2
). Легко устано-
вить, что только один из них (О
2
) может быть биологическим
отцом данного ребенка.
Если ДНК присутствует в биологическом материале в ми-
нимальных количествах, используется способ искусственного
умножения ДНК —
Do'stlaringiz bilan baham: |