Практическое занятие №1

Ход работы. Определение мочевины в сыворотке крови. 1. В центрифужную пробирку наливают 0,8 мл дистиллированной воды, отмеривают микропипеткой 0,2 мл сыворотки и добавляют 1 мл 10%-ного раствора ТХУ. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют стоять при комнатной температуре.
2. Через 15-20 мин центрифужную пробирку помещают в центрифугу, уравновешивают и центрифугирируют в течение 10 мин при 2500 об/мин. Вместо центрифугирования можно отфильтровать надсадочную жидкость в сухую чистую пробирку через маленький фильтр.
3. В одну пробирку вносят 0,5 мл надосадочной жидкости и 5 мл цветного реактива, в другую – 0,5 мл дистиллированной воды (контрольная проба), а в третью – 0,5 мл стандартного раствора мочевины (стандартная проба). Пробирки помещают в кипящую водяную баню на 20 мин.
Затем пробирки охлаждают под струей воды и фотометрируют с зеленым светофильтром (длина волны 540 нм) против контрольной пробы.
Расчет производят по формуле:
х=(ε_оп·0,2·20·1000)/ε_ст,
где х – концентрация мочевины в сыворотке, ммоль/л; ε_оп – показания ФЭКа для опытной пробы; ε_ст – показания ФЭКа для стандартной пробы; 0,2 – содержание мочевины в стандартной пробе, мкмоль; 20 – разведение сыворотки; 1000 – коэффициент для пересчета на 1 л.
Определение мочевины в моче. 1. Перед определением профильтрованную мочу разводят физиологическим раствором в отношении 1:200.
2. Готовят три чистые, сухие пробирки: в одну отмеривают 0,5 мл разведенной мочи, во вторую – 0,5 мл ванной воды. В каждую пробирку добавляют по 5 мл цветного реактива.
3. Содержимое пробирок перемешивают, пробирки помещают в кипящую баню на 20 мин, после чего их охлаждают под струей воды и колориметрируют опытную и стандартную пробы против контроля с зеленым светофильтром.
Расчет произодят по формуле:
х=(ε_опα_стV_сутk)/(ε_стV_оп),
где х – содержание мочевины в суточной моче, ммоль/л; ε_оп – показания ФЭКа для стандартной пробы; α_ст – содержание мочевины в пробе (в 0,5 мл), равное 0,2 мкмоль; V_сут – суточный объем мочи, мл; V_оп – объем мочи, взятый для анализа (0,5 мл); k – развеление мочи (k=200).