Практическое занятие №1

Лабораторная работа.
«Определение общего билирбина в сыворотке крови (метод Йендрашека и Клеггорна».
Билирубин образуется в организме в результате естественного распада гемоглобина эритроцитов в клетках ретикуло-эндотелиальной системы (печень, селезенка). Билирубин относится к группе желчных пигментов и является токсическим веществом; он обезвреживается в клетках печени. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени происходит процесс обезвреживания по схеме
Б илирубин + УДФ-глюкуроновая кислота ^{Глюкуронилтрансфераза}
Билирубин (моно- и диглюкуронид)
Глюкурониды билирубина хорошо растворимы, они выводятся из печени по желчевыводящим путям.
В сыворотке крови содержится два вида билирубина: нерастворимый (в виде комплекса с белками, обеспечивающими транспорт) и растворимый (диглюкуронид). Вместе обе формы составляют общий билирубин.
Определение содержания билирубина в крови является важным диагностическим тестом. Билирубин обычно содержится в крови в небольших количествах – 0,5-1,2 мг/дл, причем 75% из них составляет билирубин, связанный с болками (нерастворимый).
При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия, концентрация билирубина повышается до 30-35 мг/дл.
Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в малиново-красный цвет. Билирубиндиглюкуронид реагирует с диазосмесью непосредственно. Связанный с белками блирубин реагирует с диазосмесью после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива.
Ход работы. Готовят две пробирки (контрольную и опытную). Составляют реакционную смесь по схеме:

проба