И. А. Касымов,Г. Т. Мардаева,Я. К. Худайбердиев Терминология и интерпретация лабораторных данных при вирусных

ВИРУС ГЕПАТИТА G, ВГС
(Hepatitis G virus) 
— возбудитель гепатита G. Вирус гепатита G, также как GBV-A, 
GBV-B, GBV-
C и ВГС, относят к семейству Flaviviredae. Геном вируса 
представлен одноцепочечной РНК с позитивной полярностью. По своей 
организации геном ВГС подобен РНК ВГС т.е. структурные гены 
расположены у 5' области генома, а неструктурные у 3' конца.
На обоих концах генома расположены нетранслируемые зоны. 
Протяженность РНК ВГС, в различных изолятах вируса колеблется от 9103 
до 9392 нуклеотидов. Одна открытая рамка считывания несет информацию о 
вирусспецифическом полипептиде, состоящем из 2873-2910 аминокислотных 
остатков. Сравнение последовательностей геномов GBV-A, GBV-B, GBV-C и 
ВГG с ВГС продемонстрировало, что их РНК не обладает более чем 32% 
идентичности, подтверждая тем самым постулат о самостоятельности этих 
вирусов.
Известно, что на 5' и 3' — нетранслируемых регионах вирусного генома 
имеются элементы, необходимые для регуляции жизнедеятельности вируса. 
Исследования по анализу последовательностей дали противоречивые 
результаты. Так, при клонировании крайних 5' последовательностей этих 

---

участков двух вирусных изолятов из Америки и одного из Западной Африки 
не удалось обнаружить такие элементы. Стартовый кодон (AUG) инициации 
вирусного полипротеина расположен в позиции 552 (нумерация по изоляту 
PNF2161) вблизи от начала Е1 региона РНК. Установлено, что происходящие 
в У — регионе вставки и выпадения нуклеиновых кислот сдвигают открытую 
рамку считывания РНК ВГG, приводя к появлению дефектного "core" белка 
или возможно полного его отсутствия. Эти результаты позволили высказать 
предположение о использовании ВГG капсидных белков других, возможно 
еще неоткрытых , вирусов или же клеточных белков, выполняющих в данном 
случае роль структурных полипротеинов. После определения полной 
последовательности нуклеиновых кислот РНК ВГG оказалось, что в отличие 
от РНК ВГС в Е1 и Е2 регионе отсутствует гипервариабельная область. Было 
высказано предположение об отсутствии главных генотипов. Существование 
же генотипов возможно на уровне суптипов и изолятов. Вопрос о генотипах 
GBV-
C и ВГС остается по-прежнему открытым, а опубликованные данные 
по анализу различных изолятов вируса противоречивы. Тем не менее 
высказывается предположение о наличии как минимум 3-х генотипов и 
нескольких субтипов вируса. По данным И. Мушавар с соавт., изоляты из 
Западной Африки относят к 1 генотипу, в котором выделяются два субтипа 
— 1а и 2b , в Европе и Северной Америке чаще удается выявить генотип 2а и 
2b, а в Азии -3. Исследование генетической гетерогенности 354 
нуклеотидного фрагмента 5'-нетранслируемого региона ВГG, в 42 изолятах 
вируса из 14 стран (в том числе России), выявило два уровня геномной 
вариабельности:на уровне индивидуальной инфекции и уровне изолята.
Исследование неструктурного региона РНК ВГО и экспериментальное 
экспрессирование кодированных им белков определило наличие пяти белков, 
информация о которых находится в зонах NS2, NS3, NS4b, NS5a и NS5b.< Их 
вес находится в пределах от 20х10 3 до 70х10 3 дальтон. Эти белки 
выполняют функции: протеазы, хеликазы и РНК-зависимой РНК-
полимеразы.
Представляют интерес данные, полученные при изучении плавучей 
плотности частиц ВГО в градиенте сахарозы до и после их обработки 
неионном детергентом — "Твин-80", позволившие предположить наличие 
липидной оболочки у вируса. Ассоциация ВГG с липидами может мешать 
взаимодействию с антителами во время персистенции вируса.
Основным маркером, применяемым для выявления вируса гепатита G, 
диагностики и изучения эпидемиологии гепатита G, является PHK-OBV-
C/HOV, выявляемая методом амплификации с предварительным этапом 
обратной транскрипции (RT-PCR), при которой синтезируется кДНК. Для 
синтеза олигонуклеотидных праймеров использовали информацию о 
последовательностях участка РНК, кодирующего хеликазу (NS3). Этот выбор 
был сделан из-за высокой консервативности (83-99%) данного региона в 
различных изолятах вируса. Однако дальнейшие исследования выявили, что 
при тестировании некоторых образцов могут отмечаться ложнонегативные 
результаты, несмотря на наличие в них возбудителя. Учитывая это, для 

---

конструирования диагностикумов дополнительно стали использовать 
праймеры, информация о которых закодирована в 5' нетранслируемом 
регионе PHK-GBV-C/HGV.
В настоящее время фирмами "Boehringer Mannheim GmbH" ("Бёрингер 
Манхейм") и "Abbott" ("ЭББОТТ") выпускаются диагностикумы для 
выявления РНК — методом RT-PCR. В первом из них используются 
праймеры из 5'нетранслируемом и NS5a региона. Учет результатов 
проводится в ИФА с помощью биотин- авидинового комплекса. 
Диагностикум обладает высокой чувствительностью — 8х10 2 . В 
диагностикуме фирмы "ЭББОТТ" применена лигазная технология 
проведения PCR ("Abbott Lex Probe System"). Оба диагностикума пока 
рекомендованы только для научных исследований. В большинстве 
лабораторий мира применяются самостоятельно изготовленные препараты, 
что определяет расхождение результатов тестирования. Проведенный во 
Франции внешний контроль качества исследований РНК GBV-C/HGV (21 
лаборатория) выявил, что эти расхождения прежде всего определялись 
различиями в чувствительности применяемых препаратов (в 7 лабораториях 
чувствительность составляла 38-77%).
По аналогии с гепатитом С большие надежды связывали с выявлением 
антител к GBV-C/HGV. Основой для разработки диагностических препаратов 
стала информация о антигенных эпитопах, кодированных РНК GBV-C. В 
качестве вирусного антигена был использован оболочечный антиген Е2, 
возможно представляющий собой главную мишень для гуморального 
иммунитета. Участок РНК, кодирующий Е2 антиген, был клонирован и 
введен в клетки яичника китайского хомячка (СНО), которые продуцировали 
антиген. При помощи аффинной хроматографии проводили очистку Е2 
антигена и использовали при конструировании ИФА-диагностикума, 
предназначенного для выявления анти-Е2. Исследование сывороток крови, 
полученных от больных гепатитом и здоровых лиц, выявило, что в 
подавляющем большинстве случаев позитивный результат обнаружения 
анти-Е2 был отмечен при отсутствии PHK-GBV-C/HGV. Эти данные 
свидетельствуют, что в отличие от гепатита С, выявление антител при 
гепатите G не может быть использовано для поиска вирусоносителей, а 
пригодно для регистрации уже прошедшей инфекции и проведения 
эпидемиологических исследований для оценки распространения инфекции в 
различных группах населения.