O„zbekiston respublikasi oliy va o„rta maxsus ta‟lim vazirligi qarshi davlat universiteti biotexnologiya kafedrasi

2-BOB. MАTЕRIАL ВА MЕTODLАR 

 

2.1. Mitoxondriyalarni ajratib olish 

 

Mitoxondriyalarni Shneyder usuli bo‗yicha differensial sentrifugalash orqali 

150-200 grammli kalamushlar jigaridan ajratib oldik [Schneider, Hogeboom, 1951; 

Виноградов и др., 1977]. Kalamush avval harakatsizlantirilib, keyin jigari tanadan 

ajratib  olindi    va  muzli  ajratish  muhitiga  solindi.  Ajratish  muhiti  tarkibi 

quyidagicha: saxaroza 250 mM, tris-НСI 10 mM, EDTA 1 mM, рН 7,4. Jigarning 

massasi  aniqlab  olingandan  so‗ng,  mexanik  press  orqali  ezildi  va  6  hissa  ko‗p 

ajratish  muhitiga  solib  teflonli  gomogenezator  yordamida  maydalandi.  Birinchi 

sentrifugalash SLR-1 sentrifuganing rotoriga 0(1o S haroratda 7 daqiqa davomida 

daqiqasiga  1500  aylanish  tezligida  amalga  oshirildi,  so‗ngra  cho‗kmaga  tushgan 

yadro  va  hujayraning  boshqa  fragmentlari  ajratib  olindi.  Supernatantni  2-marta 

daqiqasiga  6000  aylanish  tezligida  15  daqiqa  davomida  sentrifuga  rotoriga 

qo‗yildi.  Cho‗kmani  10:1  nisbatdagi  ajratish  muhitida  suspenziyalandi.  Ajratib 

olingan  mitoxondriya  tajriba  uchun  40  daqiqa  davomida  muzli  banyada  tinim 

holatiga qo‗yildi.