|
. Immunofluorescenciya principi
Immunoflyuoresans - bul tiykarınan biologiyalıq úlgilerde isletiletuǵın hám antitellar járdeminde kletka quramındaǵı antigenlarni anıqlaw procedurası retinde klassik túrde anıqlanǵan analiz bolıp tabıladı. Áyyemgiorlarning olardıń antigeniga tán ózgesheligi immunofloresans ushın tıykar bolıp tabıladı. Biologiyalıq úlgilerge toqıma hám kletkalar kiredi. Immunofloresans izertlewshilerdińge belgili bir úlgindegi kletkalar sorawǵa juwap beretuǵın antigenni bildiredime yamasa joq ekenligin bahalawǵa múmkinshilik beredi. Immunopozitiv signal tabılǵan jaǵdaylarda immunofloresans izertlewshilerdińge antijenni qaysı subcellular bólindiler menen ańlatıwın anıqlawǵa múmkinshilik beredi. Immunofloresans materiallıqlastırılgan kletka sızıqlarında, toqıma bólimlerinde yamasa bólek kletkalarda qollanılıwı múmkin. Immunofloresans beloklar, glikanlar hám kishi biologiyalıq hám biologiyalıq bolmaǵan molekulalardıń tarqalıwın analiz qılıw ushın isletiliwi múmkin. Immunofluoresans biologiyalıq izertlewler hám medicinalıq izertlewlerde keń qollanilib, eń zárúrli hám nátiyjeli usıllardan birine aylandı Tikkeley bolmaǵan immunofloresans analizin hám tuwrıdan-tuwrı immunofloresans analizin óz ishine alǵan eki qıylı immunofluoresans analizleri ámeldegi, tikkeley bolmaǵan immunofloresans analizleri ushın protokol tiykarınan toqımalardı óz ishine aladı yamasa treparatsiya, toqıma yamasa kletkalardı fiksatsiyasi, sarum blokirovkasi, tiykarǵı áyyemgior inkubatsiyasi, ekinshi áyyemgiorning inkubatsiyasi, bınanı, nátiyje húkim hám súwretlew. Tuwrıdan-tuwrı immunofloresans tekseriwi ushın tek ekinshi dárejeli áyyemgiorsiz inkubatsiya etilgen baslanǵısh áyyemgior ámeldegi hám basqa qádemler birdey. Baslanǵısh (tuwrıdan-tuwrı ) immunofloresansda florofor menen ximiyalıq baylanısqan bir, baslanǵısh áyyemgior isletiledi. Baslanǵısh áyyemgior maqset molekulasın (antigen) teńiydi hám epitop dep atalatuǵın belgili bir regionǵa baylanısadı. Bul organizmdiń immunitet reakciyasın adaptiv immunitet menen basqaradigan process menen ámelge asıriladı. Biriktirilgen floroforni lyuminestsent mikroskopı arqalı anıqlaw múmkin, ol isletilingen xabarshına qaray, tınıshsızlanıwlangandan keyin belgili bir tolqın uzınlıǵın shıǵaradı.[9] Tuwrıdan-tuwrı immunofloresans, azmaz kemrek tarqalǵan bolsa -de, ekilemshi (tikkeley bolmaǵan ) proceduradan sezilerli ústemshiliklerge iye. Xabarshınıń tuwrıdan-tuwrı áyyemgiorga biriktirilishi procedura basqıshların azaytadı, waqtın tejeydi hám ayriqsha bolmaǵan signaldı azaytadı.[10]Bul sonıń menen birge, áyyemgiorlarning óz-ara reaktivligin hám process dawamında júzege keliwi múmkin bolǵan qátelerdi chekleydi. Biraq, bul usılda birpara kemshilikler bar. Baslanǵısh áyyemgior menen baylanısıwı múmkin bolǵan lyuminestsent molekulalardıń sanı sheklengenligi sebepli, tuwrıdan-tuwrı immunofloresans tikkeley bolmaǵan immunofloresansga salıstırǵanda sezilerli dárejede kem bayqaǵısh hám nadurıs negativlarga alıp keliwi múmkin. Tuwrıdan-tuwrı immunofloresans, sonıń menen birge, júdá qımbat bolǵan, geyde 400, 00 dollar / ml ge shekem isleytuǵın baslanǵısh áyyemgiorlardan paydalanıwdı talap etedi.
Ekilemshi (tikkeley bolmaǵan ) immunofloresans eki antiteldan paydalanadı ; jarlıqsız birinshi (tiykarǵı ) áyyemgior maqset molekulasın arnawlı baylanıstıradı hám ftoroforni alıp baratuǵın ekilemshi áyyemgior baslanǵısh áyyemgiorni teńiydi hám oǵan baylanısadı. Kóp sanlı áyyemgiorlar bir tiykarǵı áyyemgiorni bólewi múmkin. Bul antigen ushın florofor molekulalarınıń sanın kóbeytiw arqalı signal kusheytiwin támiyinleydi.[10] Bul protokol joqarıdaǵı baslanǵısh (yamasa tuwrıdan-tuwrı ) protokolǵa qaraǵanda talay quramalı hám kóp waqıt talap etedi, biraq kóbirek maslasıwshanlıqtı támiyinleydi, sebebi belgili baslanǵısh áyyemgior ushın hár qıylı ekilemshi áyyemgiorlar hám anıqlaw usıllarınan paydalanıw múmkin. Bul protokol múmkin, sebebi áyyemgior eki bólekten ibarat : ózgeriwshen region (antigenni teńiydi) hám turaqlı region (áyyemgior molekulasınıń dúzilisin quraydı ). Bul bóliniw jasalma ekenligin ańlap etiw zárúrli hám tiykarınan áyyemgior molekulası tórtew polipeptid shınjırı : eki salmaqli shınjır hám eki jeńil shınjır. Izertlewshi hár qıylı antigenlarni teńiy alatuǵın (hár túrlı ózgeriwshen regionlarǵa iye) bir neshe baslanǵısh áyyemgiorlarni jaratılıwması múmkin, biraq barlıǵı birdey turaqlı regionǵa iye. Sol sebepli bul áyyemgiorlarning barlıǵı bir ekilemshi áyyemgior tárepinen tán alınıwı múmkin. Bul tuwrıdan-tuwrı fluoroforni alıp ótiw ushın baslanǵısh áyyemgiorlarni ózgertiw ǵárejetlerin tejeydi. Hár qıylı turaqlı regionlarǵa iye bolǵan hár qıylı tiykarǵı áyyemgiorlar ádetde áyyemgiorni hár túrlı túrlerde kóteriw arqalı payda boladı. Mısalı, izertlewshi eshkinde bir neshe antigenlarni teńiy alatuǵın baslanǵısh áyyemgiorlarni jaratılıwması múmkin, keyininen eshki áyyemgiorining turaqlı regionin (" qoyan anti-eshki" áyyemgiorlari) teńiytuǵın boyaw menen baylanısqan qoyan ekilemshi áyyemgiorlarini isletiwi múmkin. Keyinirek izertlewshi tıshqanchada bólek " eshakka qarsı tıshqancha" ekilemshi antitelasi tárepinen tán alınatuǵın ekinshi baslanǵısh áyyemgiorlar kompleksin jaratılıwması múmkin. Bul qıyın bolǵan boyaw menen biriktirilgen áyyemgiorlarni bir neshe tájiriybelerde qayta isletiwge múmkinshilik beredi.
Do'stlaringiz bilan baham: |
