Обзор литературы Строение и функции эритроцитов

Роль малонового диальдегида

Малоновый диальдегид (МДА), образующийся при перекисном окислении липидов, способен реагировать с ε-NH₂-группами лизина или N-концевыми аминокислотами белков, с NH₂-группами фосфолипидов и гликозаминов. МДА формирует мостики внутри молекул и между ними с образованием шиффовых оснований.

Роль малонового диальдегида в образовании сшивок между белками

Роль малонового диальдегида в образовании сшивок
между белками и фосфолипидами

В конечном результате после окислительной атаки в белках появляются поперечные сшивки внутри одной молекулы, между разными белками, между белками и фосфолипидами. Из-за этого активность ферментативных белков изменяется, возможности структурных и сократительных белков падают, каналообразующие белки мембраны деформируются и проницаемость мембран возрастает, жизнеспособность и функционирование клетки уменьшаются.


2 Материал и методы исследования


2.1 Материал исследования

Материалом исследования служили эритроциты периферической крови практически здоровых людей (доноров), полученные с ГБУЗ «Мордовская республиканская станция переливания крови» г. Саранска.

Исследования проводили на кафедре биотехнологии и биохимии факультета биотехнологии и биологии ФГБОУ ВО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева».
2.2 Методы исследования


2.2.1 Выделение мембран эритроцитов

Для осаждения эритроцитов собранную кровь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Плазму удаляют, а верхний слой эритроцитов, содержащий лейкоциты, осторожно собирают на фильтровальную бумагу и отбрасывают. Затем эритроциты 3 раза промывают охлажденным физиологическим раствором, каждый раз осаждая клетки при 1500 об/мин в течение 10 мин, удаляя верхний слой эритроцитов фильтровальной бумагой. Один объем отмытых эритроцитов быстро и энергично смешивают с 20 объемами охлажденной до 4°С гемолизирующей среды и выдерживают при этой температуре в течение 5 мин.

Гемолизат центрифугируют при 14000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок теней промывают 5 раз 0,01 М трис-HCl буфером, каждый раз осаждая их при 14000 об/мин в течение 20 мин. Конечный осадок «белых» теней суспендируют в подходящей среде и используют в опыте, либо замораживают и хранят при –20°С.