Kolorimetrik usullar turli xil "rang reaktsiyalari" natijasida hosil bo'lgan birikmalarning rang darajasini aniqlashga asoslangan:
A) Somoji usuli (1933), glyukozaning mis oksidi gidratini mis oksidiga kamaytirish qobiliyatidan foydalanadi, bu esa o'z navbatida arsen-molibdik kislotani molibden ko'kiga aylantiradi. Bu usul o'ziga xos emas, mehnat talab qiladi va hozirda klinik diagnostika laboratoriyalarida kamdan-kam qo'llaniladi;
B) mis tortratini mis oksidiga qaytarish natijasida hosil bo'lgan molibden ko'k rangini aniqlashdan iborat Folin-Vu usuli (1919). Ikkinchisi molibdostegonik kislota bilan o'zaro ta'sirlanib, rang reaktsiyasini beradi. Usul nisbatan oddiy: uning salbiy tomoni shundaki, qonda mavjud bo'lgan glyukoza va natijada paydo bo'lgan rang o'rtasida qat'iy mutanosiblik yo'q;
C) Creselius - Seifert usuli (1928, 1942) pikrik kislotani pikramik kislotaga qaytarishga, keyin esa uni kolorimetriyaga asoslangan. Usul tez, lekin juda aniq emas. Xato 10-20% dan oshishi mumkin. Shu munosabat bilan ko'rsatilgan usul taxminiy qiymatga ega;
D) Morris (1948) va Rohe (1955) bo'yicha antron reaktivi bilan usul. Antron usuli antronning uglevodlar bilan birikmasi natijasida hosil bo'lgan rang kompleksining kolorimetriyasidan iborat. Yuqori darajada tozalangan kimyoviy moddalarni qo'llash va doimiy haroratni saqlash orqali aniq natijalarga erishish mumkin;
E) Xivarinen - Nikill (1962) tomonidan modifikatsiyalangan Gultmanning orto-toluidin usuli, bu orto-toluidinning glyukoza bilan o'zaro ta'siridan kelib chiqadigan eritma rangining intensivligini aniqlashdan iborat. Ushbu usul o'ziga xos va aniq bo'lib, "haqiqiy" glyukozani aniqlashga imkon beradi va shuning uchun standartlashtirilgan usul sifatida taklif etiladi. Kamchiliklari noorganik (sirka kislotasi) va organik (TCA) kislotalardan foydalanish va qaynash bosqichidir.
Orto-toluidin usulining reaksiya sxemasi:
Qon oqsillari + TCA ---> denaturatsiya va yog'ingarchilik
glyukoza (H +, isitish) -----> oksimetilfurfural
oksimetilfurfural + o-toluidin ------> ko'k-yashil rang
Tekshiriladigan eritma va ma'lum konsentratsiyali eritma - standart ranglarining intensivligini solishtirishga asoslangan tahlil usullari kolorimetrik (kolorimetriya) deb ataladi. Kuzatuvchining ko'zi yordamida amalga oshiriladigan vizual kolorimetriya va fotoelement yordamida amalga oshiriladigan fotoelektrik kolorimetriyani farqlang.
Agar eritma qatlamidan I0 intensivlikdagi yorug'lik nuri o'tkazilsa, u holda bu qatlamdan o'tgandan keyin yorug'lik intensivligi Ungacha kamayadi. Kolorimetriyaning asosiy qonuni - Buger-Lambert-Beer qonunining tenglamasi quyidagi ko'rinishga ega:
Bu erda C konsentratsiyasi va qatlam qalinligi l bo'lgan eritmadan o'tgandan keyin yorug'lik oqimining intensivligi; I0 - tushayotgan yorug'lik oqimining intensivligi; g - tushayotgan yorug'likning to'lqin uzunligiga, erigan moddaning tabiatiga va eritmaning haroratiga bog'liq koeffitsient; g omil molyar so'nish omili deyiladi. Eritma orqali o'tgan yorug'lik oqimining intensivligining I0 tushayotgan yorug'lik oqimining intensivligiga nisbati o'tkazuvchanlik yoki shaffoflik deb ataladi va T harfi bilan belgilanadi:
Qatlamning qalinligi 1 sm bo'lgan T qiymatiga o'tkazuvchanlik deyiladi. Uzatilishning o'zaro logarifmi so'nish (so'nish) E yoki optik zichlik D deyiladi:
Binobarin, E ning qaytarilishi eritmadagi moddaning konsentratsiyasiga to'g'ridan-to'g'ri proportsionaldir. Agar to’lovning konsentratsiyaga bog’liqligini grafik tarzda tasvirlasak, konsentratsiyani abssissada va to’lovni ordinatada chizsak, koordinata boshidan to’g’ri chiziq hosil bo’ladi (52-rasm).
Bunday grafik kolorimetriyaning asosiy qonunining tekshirilayotgan eritmalarga tadbiq etilishi haqida xulosa chiqarish imkonini beradi. Agar yechim ushbu qonunga bo'ysunsa, u holda to'lovning bog'liqligini ifodalovchi grafik; konsentratsiyadan to'g'ri chiziq bilan ifodalanadi. Agar yechim bu qonunga bo'ysunmasa, u holda to'g'rilik egri chiziqning qaysidir qismida yoki butun uzunligi bo'ylab buziladi.
