Методические указания по их выполнению. Учебно-методическим комплексом могут пользоваться студенты специального образования для самостоятельного выполнения межсессионных заданий по курсу «Микробиологии и вирусологии»

5-LABORATORIYA MASHG`ULOTI


MAVZU: O’SIMLIK XUJAYRALARIDAN ORGANOIDLARNI AJRATISH.
Mashg’ulotning maqsadi: O’simliklarning me’yoriy rivojlanish jarayonini yadro xloroplast va mitaxondriya genomi o’zaro hamkorlikda boshqaradi. Bu hamkorlikdagi jarayonning molekulyar mexanizmi bilish uchun xujayra argonoidlari genomining strukturaviy va funktsional xossalarini alohida hamda to’liq o’rganishni taqozo qiladi. Talabalar xujayra organoidini toza ajratib olish uslublarini o’rganadilar.
1-ish. G’o’za o’simligi xujayrasidan yadroni ajratib olish.
Kerakli material asbob va uskunalar. Ikki kunlik g’o’za o’simtasi, 100 ml 70 % spirt, 1 metr kapron, gomogenezator, K-23, K-32 tsentrofugalari probirkalar, 2 ta stakan, 2ta kolba.
Bufer eritmalar: A:0,4 m magniy, 50-mM tris-HCl rN-8,0, 3 mM EDTA, 0,1 % albumin (hayvon zardobidan olingan) 1 % PVP, 1mM oktanol.
Bufer B. 50 mM tris-HCl, rN-7,5, 10 % HCl, 10 mM MgCl₂
Bufer V. 50 mM tris-HCl, rN-7,5, 25 HCl, 10 mM MgCl₂


Ishning borishi: 50gr 2kunlik g’o’za o’simtasi 70 %spirtda 2 daqiqa davomida saqlangandan so’ng distirlangan suvda yuviladi. Shu usulda stirillashgan g’o’za usiimtasiga 150 ml A bufer solinadi va 30 sekunt davomida yuqori aylanishga ega bo’lgan ( 25000 3000aylanalar daq.) O’tkir pichoqli gamonoginezatorda maydalanadi. Gomogenat 4 qavatli stirillashgan kopron yordamida filtirlanadi va xujayra bo’laklarini olib tashlash uchun 10 daqiqa 4⁰ S xaroratda 600 ditlG’daq tezlikda K-23 tsentrofugasida aylantiriladi va cho’kma olib tashlashadi. Supermatning 1800 aylG’daq 4⁰S xaroratda K-23 tsentrafugasida aylantiriladi. Cho’kma 10 ml B bufer suspenziyasi xolatiga keltiriladi va qatlamli saxoroza ( 1,6-2,2m ) gradientining yuqori qismiga extiyotkorlik bilan qo’yiladi. Saxaroza eritmasi V bufer yordamida tayyorlanadi. Xosil qilingan gradient 22000 aylana daqiqa tezlikda 4⁰S xaroratda 2 soat K32 tsentrafugada aylantiriladi. Cho’kmada shkaslanmang’gan funktsional faol yadro joylashadi.