Мавзу: Хужайра днклари, днкни ажратиб олиш

Ген муҳандислиги мақсади

• Ҳар хил организмлардан олинган ДНК молекуласини майда бўлакларга (ген) ажратиш
• Генлар ичидан кераклигисини танлаб олиш ва ташиб юрувчи (вектор) га бирлаштириш
• Вектор конструкцияни хужайра ичига киритиш
• Хужайралар орасидан реципиент хужайраларни ажратиш
• Эндонуклеаза, трансфераза, лигаза
• Плазмид, транспозон
• Калций тузлари
• Генетик ва биокимёвий

Лейкоцитдан ДНК ни ажратиб олиш

ДНК ажратиб олиш усуллари

• 1 мл ҳажмли пробиркага 200 мкл текширилаётган намуна солинади ва 800 мкл лизирловчи реагент қўшилади унинг ичидаги масса аралаштирилади (5-10 марта).
• Пробиркадаги аралашма 65 С ли термостатда 5-7 мин давомида қиздирилади. Агар ДНК ажратиб олиш қаттиқ ва қуруқ бўладиган бўлса, 30-40 мин қиздирилади.
• Тоза аралашмали пробиркага 20-40 мкл Nucleos сорбентининг суспензияси қўшилади (Агар ДНК ажратиб олиш тоза қондан ёки бошқа ДНК га бой cуюқликдан ажратиб олинадиган бўлса 40 мл қўшилади). Nucleos ни ишлатишдан олдин гомоген суспензия холига келгунча аралаштирилади.
• 10 сек давомида 5000 айл/мин тезликда центрифугаланади.
• Аста-секинлик билан аралашмадан сув ажратиб олинади.
• Чўкмага 400 мкл лизирловчи агент қўшилади, яхшилаб гомоген суспензия холига келгунча вортексда аралаштирилади.
• Пробиркага 1 мл тузли буфернинг ишчи эритмаси солинади.
• Аста-секин юқорида кўрсатилган усулда супернатант олиб ташланади.
• 3-4 мин давомида 65 Сда чўкма қуритилади.
• Шу пробиркага 100-200 мкл Экстра Ген солинади.

Ажратиб олинган ДНК ни ётик электрофорез ёрдамида аниқлаш

Рестриктаза ферменти ёрдамида ДНК ни фрагментларга ажратиш

Генларни акриламид гели ёрдамида электрофорездан ажратиб олиш

Ген мухандислиги ва унинг боскичлари

• Иккинчи босқичда плазмид ёки транспозонлар ёрдамида вектор конструкция яратилади.

Ген муҳандислиги ва унинг босқичлари

• Учинчи босқичда вектор конструкция хужайра ичига киритилиб, трансген хужайра олинади.

Эътиборларингиз учун рахмат