Маруза матни

6-маъруза.
РНК ва ДНК ларнинг бирламчи тузилиши. Нуклеотид таркиби ва чекка гуруҳлар анализи. Нуклеотидлар кетма кетлигини аниқлаш усуллари


Нуклеотидлар кетма-кетлигини аниқлаш методлари
Секвенирлаш. Секвенирлашнинг икки хил методи кенг қўлланилади:
а) Кимёвий парчалаш - Максам ва Гильберт методи;
б) анжирни узиш - Сенджер методи.
Бу методларнинг ҳар бири узунлиги бирнеча юз асослардан иборат РНК ва ДНК ларнинг фрагментларга секвенирлаш учун қўлланилиши мумкин. Бу мақсад учун рестриктирловчи ферментлар ишлатилади. Рестриктирловчи ферментлар эса бактериялардан ажратиб олинади. Бу ферментлар қўш занжирли ДНК ни 4-6 жуфт асослар ораси ўлчамига эга бўлган жойидан парчалаш қобилиятига эга. Рестриктирловчи ферментлар кўп хил бўлганлиги учун уларнинг ҳар бири маълум кетма-кетликдаги асослар турган жойга таъсир этади. Масалан, E.coli бактериясида олинган E.corl фрагментини парчалаш таъсири қуйидагича бўлади:

Бундай парчаланишни қўллаш кимёвий парчалаш методи бўйича қўлланилганда, аввал ДНК молекуласидаги иккала занжир кетма-кетлигидаги 5’-охирига полинуклеотидкиназа ферменти ёрдамида радиоактив ³²РО₄ билан нишонланади. Сўнгра ДНК занжирларини маълум асос олдидан парчалаш учун тўғри келган реагент билан ишланади. Бунда узилиш А дан сўнг, кейингисида G дан сўнг, учунчисида С дан сўнг ва тўртинчисида Т дан сўнг содир бўлади. Нуклеотидлар кетма-кетлигини аниқлаш занжирни узиш методи билан олиб борилганда бошқача йўл тутилади, яъни табиий ДНК матрицасини олиб ундан радиоактив ҳолатда нишонланган комплементар занжирли ДНК синтез қилинади, синтез ДНК-полимераза ферменти ёрдамида амалга оширилади. Ҳосил бўлган ДНК занжирларини ва уларнинг кетма-кетлигини аниқлаш учун ҳар бир аралашма гель-электрофорез ёрдамида ажратилиб, радиоавтограф ҳолатда ёзиб олинади. Олинган фотопленкадан асосларнинг кетма-кетлиги аниқланади.